冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法技术

本发明专利技术属于真菌栽培技术领域，具体是一种冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法，解决了现有人工冬虫夏草不能规模化培养的问题。步骤如下：选择头孢霉和头棒束；制备头孢霉液体菌种和头棒束孢霉液体菌种；配置固体培养基，原料为：玉米渣、黄豆粉、小麦粒、高粱粒、蚕蛹粉、全鸡蛋、黑豆含皮粗粉、脱脂胡麻籽油以及营养液，营养液包括：鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨；混匀接种；培养得子实体和菌丝体。本发明专利技术所得子实体和菌丝体经检测，子实体含腺苷≥０．０２％，含虫草素≥０．１％，菌丝体含腺苷≥０．０５５％，指纹图谱测试结果显示其基因相似度＞９７％，急性毒性实验、长毒实验测试显示无毒，可为天然虫草的替代品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于真菌栽培
，具体涉及一种冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方 法。
技术介绍
80年代以来，真菌工作者从天然虫草中分离出多个虫草菌种(如头孢、束孢、被 孢、头棒束孢等等)，并将菌种接到蝙蝠蛾幼虫体上或人工培养基上，幼虫体上和培养基上 都能长出虫草，经检测其菌丝和子座的有效成分均与天然虫草的有效成分相当，而且有些 成分高于天然，以此证明了人工虫草可替代天然虫草，然而20多年过去了，人工复合虫草 仍然停留在实验室。有些企业以大罐发酵模式把虫草生产发展为规模化，但投资大、成本 高、分离不出菌丝体、菌种易退化。
技术实现思路
本专利技术为了解决现有人工冬虫夏草不能规模化培养的问题，提供了一种冬虫夏草 菌丝体和子 实体的栽培方法。本专利技术采用如下的技术方案实现1、一种，其特征在于步骤如下1)、菌种的选择，如下两个无性世代试管种①、头孢霉C印halosporium sinensis chen sp nov.]②、头棒束孢霉Isaria cretacea.两个无性世代菌种分别在PDA培养基转管培养后，历练复壮处理，提纯复壮后的 菌种保存备用，在4°C冰箱中存放，时间不超过2个月；2)、液体菌种制备，各组成的比例为重量比，①、头孢霉液体菌种制作成分蚕蛹粉、酵母片、白糖、VB、无机盐添加剂、水，各成分比例按顺序为2 1 6 0. 3 0. 7 90，混合以上比例的成分得到头孢霉液体培养基，调节PH至6 7，高压120°C灭菌处 理40分钟，后将100份头孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头孢霉菌种15份，缓慢摇 勻，培养一周，温度15 20°C，即得头孢霉液体菌种，保存备用，无机盐添加剂包括MgSO4 · 7H20、K2HPO4 · 3H20、[NH4J2SO4,无机盐添加剂的各 组分相对上述头孢霉液体培养基的重量比为MgSO4 · 7H20 0.2%, K2HPO4 · 3H20 0.3%, [NHJ2SO4O. 2%,②、头棒束孢霉液体菌种的制作成分蚕蛹粉、酵母粉、白糖、VB、玉米粉、水，各成分的比例2 1 6 0. 1 6 85，各成分混为头棒束孢霉液体培养基，调节PH6 7，高压120°C灭菌40分钟，将100份头棒束孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头棒束孢霉菌种15份，以15 20°C条件 下摇勻，培养7天，即得头棒束孢霉液体菌种，保存备用；3)、固体培养基的配置，两个菌种用同种固体培养基，配方如下玉米渣30 40份、黄豆粉2 10份、小麦粒15 20份、高粱粒5 10份、蚕蛹 粉2 3份、全鸡蛋5 10份、黑豆含皮粗粉20 30份、脱脂胡麻籽油3 5份，以上物料分别用水浸泡至无干心后捞出来浙去表皮水分，混勻为湿料，分装加入 营养液成固体培养基，灭菌，每份固体培养基包括湿料100g，加入营养液10ml，营养液鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨按1 1 2 3 3比例混合于重量为 上述各物料总重量4倍的水中，煮沸2小时，过滤得滤液，然后在滤液中补水得营养液，滤液 补水后的总重量与煮沸前各物料和水混合的总重量相等，4)、混勻接种， 在无菌条件下，每IOOml头孢菌液体种中混入IOml的头棒束孢霉液体种，缓慢摇 勻即得混合菌种，然后立即接种，每份固体培养基中接入20ml混合菌种，封口后进入培养室培养，5)、培养①、避光，17°C 士 1°C，每日早晚通风两次各30分钟，②、接种后培养20 26天，以2001x日光灯每日照射彡10小时，培养温度改变为 9 24°C，昼夜温差彡15°C，保持6 10天，此时子实体的原基和白色菌丝已经开始生长， 此时，在18 23°C的散光中培养15天左右，即可收获，分别取出子实体和菌丝体。上述要求所用物料均为无污染的天然物料、培养环境所需大气、土壤、水均需无污^fe ο本专利技术所得子实体和菌丝体经检测，子实体含腺苷彡0. 02%,含虫草素彡0. 1 %， 菌丝体含腺苷> 0. 055%，指纹图谱测试结果显示其基因相似度>97%，急性毒性实验、长 毒实验测试显示无毒，可为天然虫草的替代品。具体实施例方式实施例1 ，步骤如下，各组成的比例按比重 计算1.菌种的选择，如下两个无性世代的试管种头抱霉头棒束孢霉2.对菌种需要历练和复壮，得到的菌种要转接于PDA试管培养基上，在适当温度 (17V 士 1°C )中培养7天后，置于36°C高温，-20°C低温、烟雾熏蒸、紫外线照射、杂菌感染 环境中历练，使菌种得到强化训练，在复壮的过程中死亡的菌种视为退化种，弃之；不退化 生长旺盛的菌种即可使用。每个环境中放置不少于12 24小时。在此基础上置于15 20°C条件下培养并进行提纯复壮后的菌种保存备用(在4°C冰箱中存放时间不得超过2个 月)。3.菌种的特征和液体种的制作。提纯复壮后的菌种直接用于栽培使用的液体种，按常规灭菌、接种、摇瓶。液体种配方与制法如下①头孢霉配方蚕蛹粉2份、酵母粉1份、白糖6份、VB 0. 3份，无机盐添加剂0. 7 份(无无机盐添加剂包括MgSO4 · 7H20、K2HPO4 · 3H20、[NHj2SO4,无机盐添加剂的各组分相 对上述头孢霉液体培养基的重量比为=MgSO4 · 7H200. 2%, K2HPO4 · 3H20 0. 3%, [NHj2SO4 0. 2% )、水90份，混勻为得到混合液，调节PH6 7，高压120°C灭菌40分钟。按常规操作， 将100份混合液体接入上述复壮保存备用的头孢霉菌种15份，15-20°C条件下摇勻，培养7 天，即为头孢霉液体种，保存备用。②头棒束孢霉配方蚕蛹粉2份、酵母粉1份、白糖6份、VB 0. 1份、玉米粉6份、 水85份、混为头棒束孢霉液体培养基，调节PH6 7，高压120°C灭菌40分钟。按常规操作， 将100份头棒束孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头棒束孢霉菌种15份，以15-20°C 条件下摇勻，培养7天，即为头棒束孢霉液体种，保存备用。4.固体培养基的配置，两个菌种用同种固体培养基，配方如下 玉米渣40份、黄豆粉10份、小麦粒15份、高粱粒5份、蚕蛹粉2份、全鸡蛋5份、 黑豆含皮粗粉20份、脱脂胡麻籽渣3份，备注以上分别用水浸泡至无干心后捞出来浙去表面水分，混勻为湿料，分装加入 营养液成固体培养基，灭菌，每份固体培养基包括湿料100g，加入营养液10ml，按常规操作 灭菌。营养液鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨按1 1 2 3 3比例混合于重量为 上述各物料总重量4倍的水中，煮沸2小时，过滤得滤液，然后在滤液中补水得营养液，滤液 补水后的总重量与煮沸前各物料和水混合的总重量相等。5.混勻接种在无菌操作的环境下，每IOOml头孢霉液体菌种中混入IOml的头棒束孢霉液体菌 种随手摇勻，然后立即接种上述每份固体培养基中接入20ml混合菌种封好进入培养室培养。6.培养①避光，17°C 士 1°C，培养20 26天，每日早晚避风两次各30分钟。②当菌丝生长培养基后，2001x光照每日彡10小时，培养温度改变为9_24°C，昼夜 温差> 15°C，保持6 10天。此时子实体的原基和白色菌丝争先共生，在18 23°C的散光 中培养15天左右，子实体上长出孢子囊时即可收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冬虫夏草菌丝体和子实体的栽培方法，其特征在于步骤如下：１）、菌种的选择，如下两个无性世代试管种：①、头孢霉【Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍｓｉｎｅｎｓｉｓｃｈｅｎｓｐｎｏｖ．】②、头棒束孢霉【Ｉｓａｒｉａｃｒｅｔａｃｅａ．】两个无性世代菌种分别在ＰＤＡ培养基转管培养后，历练复壮处理，提纯复壮后的菌种保存备用，在４℃冰箱中存放，时间不超过２个月；２）、液体菌种制备，各组成的比例为重量比，①、头孢霉液体菌种制作：成分：蚕蛹粉、酵母片、白糖、ＶＢ、无机盐添加剂、水，各成分比例按顺～２３℃的散光中培养１５天左右，即可收获，分别取出子实体和菌丝体。序为：２∶１∶６∶０．３∶０．７∶９０，混合以上比例的成分得到头孢霉液体培养基，调节ＰＨ至６～７，高压１２０℃灭菌处理４０分钟，后将１００份头孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头孢霉菌种１５份，缓慢摇匀，培养一周，温度：１５～２０℃，即得头孢霉液体菌种，保存备用，无机盐添加剂包括ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］.３Ｈ↓［２］Ｏ、［ＮＨ↓［４］］↓［２］ＳＯ↓［４］，无机盐添加剂的各组分相对上述头孢霉液体培养基的重量比为：ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ０．２％、Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］.３Ｈ↓［２］Ｏ０．３％、［ＮＨ↓［４］］↓［２］ＳＯ↓［４］０．２％，②、头棒束孢霉液体菌种的制作成分：蚕蛹粉、酵母粉、白糖、ＶＢ、玉米粉、水，各成分的比例：２∶１∶６∶０．１∶６∶８５，各成分混为头棒束孢霉液体培养基，调节ＰＨ６～７，高压１２０℃灭菌４０分钟，将１００份头棒束孢霉液体培养基中接入复壮保存备用的头棒束孢霉菌种１５份，以１５～２０℃条件下摇匀，培养７天，即得头棒束孢霉液体菌种，保存备用；３）、固体培养基的配置，两个菌种用同种固体培养基，配方如下：玉米渣３０～４０份、黄豆粉２～１０份、小麦粒１５～２０份、高粱粒５～１０份、蚕蛹粉２～３份、全鸡蛋５～１０份、黑豆含皮粗粉２０～３０份、脱脂胡麻籽油３～５份，以上物料分别用水浸泡至无干心后捞出来沥去表皮水分，混匀为湿料，分装加入营养液成固体培养基，灭菌，每份固体培养基包括湿料１００ｇ和加入的营养液１０ｍｌ，营养液：鸡血、松针、胡萝卜、黑豆、牛骨按１∶１∶２∶３∶３比例混合于重量为上述各物料总重量４倍的水中，煮沸２小时，过滤得滤液，然后在滤液中补水得营养液，滤液补水后的总重量与煮沸前各物料和水混合的总重量相等，４）、混...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周文贵，周翔，胡素华，
申请(专利权)人：杨毅，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]