【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水产养殖、刺参催产信息素领域，具体涉及一种筛选刺参催产信息素的方法及该催产信息素的应用。
技术介绍
1、刺参(apostichopus japonicus)又称仿刺参，隶属棘皮动物门海参纲楯手目刺参科，是一种营养和经济价值很高的海洋无脊椎动物。近年来，随着人们对刺参高营养价值的认可，刺参的人工养殖规模不断扩大，已成为重要的海水养殖生物，对于刺参苗种的需要也逐渐增大。当前，刺参排放精卵多采用人工阴干流水刺激的方法，但当雌雄刺参性腺发育不同步时，多出现流产或不产等现象，严重影响了刺参苗种的繁育。
2、刺参属于雌雄异体，达到性成熟后，雌雄刺参分别将精子、卵子排放到体外，精卵经体外受精、体外发育形成子代，但精卵在海水中存活的时间极短，在自然界中，一般是雄性排放精子的时间早于雌性半小时左右。已有研究证明海参纲物种在达到性成熟时雄性个体可通过释放信息素诱集同类聚集并排放配子，以提高精卵受精的成功率，但目前，学对刺参的繁殖信息素的研究内容较少，还未鉴定出一种物质使刺参聚集和诱导产卵，并且现有的刺参催产素存在的问题：注射kcl时因注射量要求量大，很容易引起亲参排出包括性腺在内的内脏；注射nglwy时刺参的产卵量少，如平均体重为210克的成熟亲参，平均产卵量只有43万粒，浮游幼体期间成活率只有20～50％，稚参变态率只有15～30％。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种筛选刺参催产信息素的方法及该催产信息素的应用。
2、为实现上述
3、优选的，所述的催产信息素β-谷甾醇乙酸酯为beta-sitosterol acetate，化学式为c31h52o2，所述催产信息素类似物为β-谷甾醇，化学式为c29h50o。
4、优选的，所述的催产信息素来源于雄性刺参的排精水体、体腔液或养殖水体。
5、作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供β-谷甾醇作为刺参信息素的应用，可以促进刺参聚集和催产。
6、作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供一种刺参催产信息素的筛选方法，其包括如下步骤，
7、步骤一、联合液相色谱-串联质谱lc-ms/ms检测待测雄性刺参的排精水体、养殖水体、体腔液的代谢物；
8、步骤二、对联合液相色谱-串联质谱lc-ms/ms数据进行定量校准；
9、步骤三、基于步骤二中联合液相色谱-串联质谱lc-ms/ms数据的差异鉴定待测雄性刺参产生的目标催产信息素；
10、步骤四、获取步骤三中的目标催产信息素类似物；
11、步骤五、用目标催产信息素类似物进行行为验证；
12、步骤六、确定目标催产信息素类似物的浓度；
13、步骤七、确定类似物与目标催产信息素效果相同，即刺参催产素。
14、优选的，步骤一中，样本水体使用体积比为1：1的乙腈和甲醇混合液作为提取液，在低温超声下进行提取，提取液中添加内标l-2-氯苯丙氨酸。
15、优选的，提取后离心，再用体积比为1：1的乙腈和水混合液作为复溶液复溶，并在低温超声下进行萃取。
16、优选的，步骤三中，鉴定的色谱条件为，hss t3色谱柱，流动相a为95％水+5％乙腈，流动相b为47.5％乙腈+47.5％异丙醇+5％水，流速为0.40ml/min，柱温为40℃。
17、优选的，步骤三中，鉴定的质谱条件为，采用正负离子扫描模式，质量扫描范围m/z：70-1050，离子喷雾电压，正离子电压3500v，负离子电压2800v，鞘气40psi，辅助加热气10psi，离子源加热温度400℃，20-40-60v循环碰撞能，ms1分辨率70000，ms2分辨率17500。
18、优选的，刺参的排精水体为雄性刺参单独放置于小桶中两小时后收集到的充满精液的水体10ml，养殖水体为刺参单独放置于小桶中两小时后未排放精子的养殖水体10ml，体腔液为未排放精子的雄性刺参体腔液；所述步骤二中定量校准指原始数据包含质控样本和检测样本同时对原始数据进行一系列的预处理，主要包括对原始数据缺失值进行模拟和数据归一化。
19、作为本专利技术的另一方面，本专利技术提供一种刺参聚集引诱剂，其包括海泥和β-谷甾醇，其中β-谷甾醇的含量大于10ug/l。
20、优选的，步骤五中所述行为验证为使用催产信息素对刺参进行诱集实验和诱导产卵实验，确定刺参催产素效果。
21、本专利技术的有益效果如下：
22、本专利技术通过lc-ms鉴定出刺参的一种催产信息素，可运用到刺参实际养殖生产中，为刺参生物学、刺参生态学等领域的研究提供新的视角和理论基础，通过类比得到刺参催产信息素并人工合成，可以引导刺参的繁殖行为，促进刺参的繁殖和增殖，从而实现刺参资源的可持续利用和保护，填补了目前刺参研究中有关信息素的空白。
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1.刺参催产信息素组合物，其特征在于：包括β-谷甾醇、异亮氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-色氨酸、β-丙氨酸-L-精氨酸、1,7-二甲基鸟苷、葡萄糖醛酸乙酯、2-羟基氯丙烷、3-氧代溴莫尼定、5'-羧基色胺醇、麦角甾-二烯-三醇、β-谷甾醇乙酸酯中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的刺参催产信息素组合物，其特征在于：所述的催产信息素来源于雄性刺参的排精水体、体腔液或养殖水体。
3.β-谷甾醇作为刺参信息素的应用，其特征在于：可以促进刺参聚集和催产。
4.一种权利要求1或2所述的刺参催产信息素的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤，
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：步骤一中，样本水体使用体积比为1：1的乙腈和甲醇混合液作为提取液，在低温超声下进行提取，提取液中添加内标L-2-氯苯丙氨酸。
6.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：提取后离心，再用体积比为1：1的乙腈和水混合液作为复溶液复溶，并在低温超声下进行萃取。
7.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：步骤三中，鉴定的色谱条件为，HSS T
8.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：步骤三中，鉴定的质谱条件为，采用正负离子扫描模式，质量扫描范围m/z：70-1050，离子喷雾电压，正离子电压3500V，负离子电压2800V，鞘气40psi，辅助加热气10psi，离子源加热温度400℃，20-40-60V循环碰撞能，MS1分辨率70000，MS2分辨率17500。
9.一种刺参聚集引诱剂，其特征在于：包括海泥和β-谷甾醇，其中β-谷甾醇的含量大于10ug/L。
...【技术特征摘要】
1.刺参催产信息素组合物，其特征在于：包括β-谷甾醇、异亮氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-色氨酸、β-丙氨酸-l-精氨酸、1,7-二甲基鸟苷、葡萄糖醛酸乙酯、2-羟基氯丙烷、3-氧代溴莫尼定、5'-羧基色胺醇、麦角甾-二烯-三醇、β-谷甾醇乙酸酯中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的刺参催产信息素组合物，其特征在于：所述的催产信息素来源于雄性刺参的排精水体、体腔液或养殖水体。
3.β-谷甾醇作为刺参信息素的应用，其特征在于：可以促进刺参聚集和催产。
4.一种权利要求1或2所述的刺参催产信息素的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤，
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于：步骤一中，样本水体使用体积比为1：1的乙腈和甲醇混合液作为提取液，在低温超声下进行提取，提取液中添加内标l-2-氯苯丙氨酸。
6.根据权利要求4所述的筛选...
【专利技术属性】
技术研发人员：高兆明，茹小尚，徐丛，邓贝妮，梁文可，王嘉泽，
申请(专利权)人：滨州市海洋发展研究院，
类型：发明
国别省市：
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