【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及褐藻胶裂解酶突变体及其应用。
技术介绍
1、近年来，以褐藻胶为代表的海藻多糖及其降解产物——特异性海藻寡糖为原料的海洋药品和功能食品的开发和功能研究受到广泛关注。褐藻胶寡糖是由β-d-聚甘露糖醛酸(m)和α-l-聚古罗糖醛酸(g)组成的线型低聚合物。已有研究表明，褐藻胶寡糖具有降血脂、抗病毒、抗肿瘤以及抗氧化等多种生理活性，且单糖组成对其生物活性有显著影响，如随m/g比值的增大，褐藻胶寡糖的抗氧化活性和免疫活性增强，不饱和褐藻胶寡糖具有更好的抗氧化和免疫活性；低m/g比值的褐藻胶可以通过抑制胰酯酶活性从而具有更好的抗肥胖活性，不饱和褐藻胶寡糖的抗肥胖活性优于饱和褐藻胶寡糖；g寡糖可以更好的提高短链脂肪酸(scfa)含量，从而促进肠道内有益菌的增长。因此，挖掘酶学性质好的褐藻胶裂解酶用以制备特定组成的不饱和褐藻胶寡糖至关重要。
2、褐藻胶裂解酶具有将褐藻胶裂解为褐藻寡糖的活性。目前，已有越来越多的褐藻胶裂解酶被挖掘并克隆表达，其表达量、酶活力较原始酶均有所提升，但其酶学性质，如热稳定性、酶活力仍需进一步提升。通过理性设计的方法对酶进行定向改造可以提升酶学性质，已有越来越多的酶通过定向改造来提升了性质，而挖掘热稳定性好的可定向制备特定单糖组成褐藻胶寡糖的褐藻胶裂解酶仍是研究者关注的重点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供褐藻胶裂解酶突变体及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的褐藻胶裂解酶突变体相对于原始酶，热稳定性和酶
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种褐藻胶裂解酶突变体q240l，氨基酸序列如seq id no.3所示。
4、本专利技术还提供褐藻胶裂解酶突变体q240l的编码基因，核苷酸序列如seq id no.4所示。
5、本专利技术还提供一种表达褐藻胶裂解酶突变体q240l的生物材料，包含核苷酸序列如seq id no.4所示的编码基因；
6、所述生物材料包括重组表达载体或重组微生物菌株。
7、本专利技术还提供一种褐藻胶裂解酶突变体k245p，氨基酸序列如seq id no.5所示。
8、本专利技术还提供褐藻胶裂解酶突变体k245p的编码基因，核苷酸序列如seq id no.6所示。
9、本专利技术还提供一种表达褐藻胶裂解酶突变体k245p的生物材料，包含核苷酸序列如seq id no.6所示的编码基因；
10、所述生物材料包括重组表达载体或重组微生物菌株。
11、本专利技术还提供以下(a)-(d)任一项所述的物质在制备褐藻胶裂解酶中的应用：
12、(a)上述的褐藻胶裂解酶突变体q240l的编码基因；
13、(b)上述的表达褐藻胶裂解酶突变体q240l的生物材料；
14、(c)上述的褐藻胶裂解酶突变体k245p的编码基因；
15、(d)上述的表达褐藻胶裂解酶突变体k245p的生物材料。
16、本专利技术还提供上述的褐藻胶裂解酶突变体q240l或褐藻胶裂解酶突变体k245p在催化褐藻胶裂解生成褐藻胶寡糖中的应用。
17、本专利技术还提供一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性和酶活性的方法，包括将所述褐藻胶裂解酶的第240位氨基酸突变为亮氨酸，制备得到氨基酸序列如seq id no.3所示的褐藻胶裂解酶突变体的步骤；
18、所述褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
19、本专利技术还提供一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性和酶活性的方法，包括将所述褐藻胶裂解酶的第245位氨基酸突变为脯氨酸，制备得到氨基酸序列如seq id no.5所示褐藻胶裂解酶突变体的步骤；
20、所述褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
21、本专利技术公开了以下技术效果：
22、本专利技术利用定点突变方法，对原始褐藻胶裂解酶(氨基酸序列如seq id no.1所示)进行改造，制备得到褐藻胶裂解酶突变体，以提高褐藻胶裂解酶的热稳定性和活性。
23、利用本专利技术制备的褐藻胶裂解酶突变体，定向制备不饱和褐藻胶寡糖，与现有酸法水解制备褐藻胶寡糖的方法相比，克服了破坏性大的缺点；与现有的酶法水解制备褐藻胶寡糖的方法相比，酶解效率更高。
24、本专利技术制备的褐藻胶裂解酶突变体的热稳定性高于其他已报道的褐藻胶裂解酶，更适合应用于工业上定向制备不饱和褐藻胶寡糖。
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1.一种褐藻胶裂解酶突变体Q240L，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体Q240L的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.一种表达权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体Q240L的生物材料，其特征在于，包含权利要求2所述的编码基因；
4.一种褐藻胶裂解酶突变体K245P，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
5.一种如权利要求4所述的褐藻胶裂解酶突变体K245P的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
6.一种表达权利要求4所述的褐藻胶裂解酶突变体K245P的生物材料，其特征在于，包含权利要求5所述的编码基因；
7.以下(a)-(d)任一项所述的物质在制备褐藻胶裂解酶中的应用：
8.如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体Q240L或权利要求3所述的褐藻胶裂解酶突变体K245P在催化褐藻胶裂解生成褐藻胶寡糖中的应用。
9.一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性和酶活性的方
10.一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性和酶活性的方法，其特征在于，包括将所述褐藻胶裂解酶的第245位氨基酸突变为脯氨酸，制备得到氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示褐藻胶裂解酶突变体的步骤；
...【技术特征摘要】
1.一种褐藻胶裂解酶突变体q240l，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.3所示。
2.一种如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体q240l的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.4所示。
3.一种表达权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体q240l的生物材料，其特征在于，包含权利要求2所述的编码基因；
4.一种褐藻胶裂解酶突变体k245p，其特征在于，氨基酸序列如seq id no.5所示。
5.一种如权利要求4所述的褐藻胶裂解酶突变体k245p的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.6所示。
6.一种表达权利要求4所述的褐藻胶裂解酶突变体k245p的生物材料，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨敏，牟海津，朱常亮，崔永燕，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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