【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种内含子dna及其增强基因表达能力中的应用，属于基因领域。
技术介绍
1、真核生物基因通常由若干个外显子和内含子互相间隔连接而成。外显子是基因的编码区。内含子是非编码序列，位于基因中外显子之间。基因转录时，外显子和内含子同时被转录成前体rna分子，内含子序列被剪切删除，而外显子保留产生有功能的成熟rna。
2、由于内含子是非编码序列，因此曾被认为是“junk”序列。随着分子生物学技术的发展，1983年，研究发现，内含子使转基因小鼠的转录效率提高了约十倍以上，指出内含子对增强基因表达有着非常重要的作用。近年来对不同物种的研究发现，即使不包含转录因子的结合位点，内含子也会增强基因的表达。这种现象被称为“内含子介导的增强”。在基因工程领域，大量实验表明通过加入内含子序列，外源基因的表达可明显改善。例如，玉米adhl基因内含子使转基因玉米中报告基因的表达水平提高100倍。因此，内含子应用在植物基因工程领域存在巨大潜力。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种新的内含子及其在增强基因表达中的应用。
2、技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供的内含子dna的核苷酸序列如seq idno.1所示。
3、本专利技术还提供了一种表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株，其含有所述内含子dna。
4、本专利技术还提供了一种定性或定量鉴定内含子dna能否增强基因表达的方法，包括以下步骤：
5、
6、(2)pcr扩增含有sui1基因启动子及带内含子的sui1基因5’utr区域的序列，利用同源重组法将其与步骤(1)得到的骨架载体连接，构建得到sui1 pro+intron:gfp质粒；
7、(3)pcr扩增含有sui1基因启动子及不带内含子的sui1基因5’utr区域的序列，将其与步骤(1)得到的骨架载体连接，构建得到sui1 pro+utr:gfp质粒；
8、(4)将步骤(1)所述的sui1 pro:gfp质粒、步骤(2)所述的sui1 pro+intron:gfp质粒和步骤(3)所述的sui1 pro+utr:gfp质粒分别转化至水稻原生质体中，观察三种质粒的相对荧光强度；
9、(5)当所述sui1 pro:gfp质粒有相对荧光强度，且所述sui1 pro+intron:gfp质粒的相对荧光强度高于sui1 pro+utr:gfp质粒的相对荧光强度时，权利要求1所述内含子dna增强了gfp基因的表达；当所述sui1 pro:gfp质粒没有相对荧光强度，或所述sui1 pro+intron:gfp质粒的相对荧光强度不高于sui1 pro+utr:gfp质粒的相对荧光强度时，权利要求1所述内含子dna没有增强gfp基因的表达。
10、其中，步骤(1)中所述sui1基因启动子由引物对扩增得到，所述引物对的核苷酸序列如seq id no.7和seq id no.8所示。
11、其中，步骤(2)中扩增所述序列的引物对的核苷酸序列如seq id no.9和seq idno.10所示。
12、其中，步骤(2)中所述序列的核苷酸序列如seq id no.3所示。
13、其中，步骤(3)中扩增所述序列的引物对的核苷酸序列如seq id no.11和seq idno.12所示。
14、其中，步骤(3)中所述序列的核苷酸序列如seq id no.4所示。
15、其中，步骤(4)中的水稻包括禾本科稻属粳稻日本晴(oryza satival.spp.japonica var.nipponbare)。
16、本专利技术还提供了所述内含子dna或所述表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株在增强基因表达能力中的应用。
17、鉴定原理：
18、转录水平的调控是影响基因表达调控的重要层次之一。基因的启动子如同“开关”决定转录的起始。启动子与其它调控元件(如增强子和内含子)联合作用，决定基因表达的强弱。本专利技术中发现sui1基因5’utr区的1049bp内含子能够增强基因表达。sui1(loc_os07g34589)基因的启动子能启动报告gfp基因表达，当启动子和5’utr区的内含子共同存在时，gfp表达上升，荧光信号显著增强，说明1049bp内含子能显著促进基因表达。本专利技术确定了sui1基因5’utr区的1049bp内含子序列，并在瞬时转化体系中，验证了该内含子增强基因表达的功能。
19、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：本专利技术的内含子dna分子为1049bp，对转录具有较好的增强效果。
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1.一种内含子DNA，其特征在于，所述DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株，其特征在于，其含有权利要求1所述内含子DNA。
3.一种定性或定量鉴定权利要求1所述内含子DNA是否能够增强基因表达能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述SUI1基因启动子由引物对扩增得到，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中扩增所述序列的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述序列的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中扩增所述序列的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的水稻包括禾本科稻属粳稻日本晴(Oryza sativa L.spp.Japonica var.Nipponbare)。
10.权利要求1所述内含子DNA或权利要求2所述表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株在增强基因表达能力中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种内含子dna，其特征在于，所述dna的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.一种表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株，其特征在于，其含有权利要求1所述内含子dna。
3.一种定性或定量鉴定权利要求1所述内含子dna是否能够增强基因表达能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述sui1基因启动子由引物对扩增得到，所述引物对的核苷酸序列如seq id no.7和seq id no.8所示。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中扩增所述序列的引物对的核苷酸序列如seq id no.9和seq id no.10所示。
6.根据权利...
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