用于绵羊FecB基因分型的crRNA、试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及绵羊基因分型技术领域，具体涉及用于绵羊FecB基因分型的crRNA、试剂盒及方法。所述crRNA为SEQ ID NO.1所示的crRNA‑a和SEQ ID NO.2所示的crRNA‑g。所述试剂盒包括RPA引物、crRNA、Cas12a核酸酶和ssDNA荧光探针，所述RPA引物为针对绵羊FecB基因的扩增引物。本发明专利技术的crRNA、试剂盒，基于CRISPR/Cas12a系统与RPA扩增技术鉴别绵羊FecB外显子第746位的基因型，在检测过程中不需要大型昂贵的仪器，且检测时间缩至约40min，极大地拓展了适用场景，更适用于现场检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及绵羊基因分型，具体涉及用于绵羊fecb基因分型的crrna、试剂盒及方法。

技术介绍

1、fecb是绵羊上首个被发现的多胎主效基因，该基因第8外显子的第746位碱基发生错义突变(a746g)。携带该突变的绵羊卵巢中，以剂量依赖式降低了颗粒细胞对bmp4刺激amh产生的反应，有效提高绵羊的排卵率和产羔数。fecb突变的筛选和鉴定为多胎绵羊的选育提供了坚定的技术支撑，极大的提高了羊产业的经济效益。

2、针对fecb基因的检测技术目前应用最广泛的是聚合酶链式反应(pcr)+sanger测序法，但pcr需要精密的温控设备、耗时过长、样品纯度要求较高且sanger测序极依赖于业务人员的专业水平，不适用于现场检测。重组酶聚合酶扩增(rpa)技术由英国twistdx inc公司开发，其关键在于根据目的基因序列设计扩增引物，通过链置换反应在37-42℃条件下完成核酸扩增。无需通过高温解链，扩增过程十分快，扩增模板含量要求低(10-100copy)，一般约20min获得可检出水平的扩增产物，灵敏度极优于pcr。rpa因其特点被广泛应用于病原物检测、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于绵羊FecB基因分型的crRNA，其特征在于，所述crRNA为SEQ ID NO.1所示的crRNA-a和SEQ ID NO.2所示的crRNA-g。

2.一种用于绵羊FecB基因分型的试剂盒，其特征在于，包括RPA引物、权利要求1所述crRNA、Cas12a核酸酶和ssDNA荧光探针，所述RPA引物为针对绵羊FecB基因的扩增引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针的5′端用FAM荧光基...

【技术特征摘要】

1.用于绵羊fecb基因分型的crrna，其特征在于，所述crrna为seq id no.1所示的crrna-a和seq id no.2所示的crrna-g。

2.一种用于绵羊fecb基因分型的试剂盒，其特征在于，包括rpa引物、权利要求1所述crrna、cas12a核酸酶和ssdna荧光探针，所述rpa引物为针对绵羊fecb基因的扩增引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述rpa引物的核苷酸序列如seq idno.3和seq id no.4所示。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述ssdna荧光探针的5′端用fam荧光基团修饰，3′端用bhq1淬灭基团修饰。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述ssdna荧光探针的序列为fam-ttatt-bhq1。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括红细胞裂解液、核酸释放剂、era试剂、nebuffer2.1和rna酶抑制剂，所述era试剂包括basic buffer、reaction buffer、激活剂。

7.基于权利要求2所述试剂盒的鉴别绵羊fecb基因snp基因型的方法，其特征在于，步骤如下：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，获得产物2的体系为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小龙，吴庭杰，周世卫，王鑫杰，王倩，寇启芳，陈玉林，杨冲，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：