【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种抗cry 1c的纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis，bt)是一类包括许多亚种的晶体芽孢杆菌，且能产生多种对昆虫有害的杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystal proteins，icps)。bt杀虫晶体蛋白能特异性地毒杀各种昆虫且对人畜无害，如鳞翅目、双翅目和螨类等害虫。1987年，有科学家开始将bt毒素转入烟草中，先后获得了棉花、玉米等多种转基因植物。目前，bt毒素作为微生物杀虫剂广泛应用于防治害虫或转基因植物中。关于bt蛋白的研究中，研究最多是cry 1类毒素，如cry 1ab和cry 1ac。本专利技术所涉及的cry 1c毒素属于一种cry1类毒素，其基因所编码的杀虫蛋白同样可以抑制和杀死鳞翅目害虫，尤其是对玉米螟虫会产生剧毒，且cry 1c毒素的毒性高于cry 1a。目前，已有研究学者使用生物技术手段将cry1c基因导入到水稻、大豆、玉米等植物中，且成功获得了具有抗鳞翅目害虫抗性的转基因植物。
2、随着社会和人类生活水平的发展，人们对转基因食物愈发关注，尤其是安全性问题。有研究表明，cry毒素会在小鼠的血液中产生毒性；cry毒素对人类健康有着潜在风险。目前，转基因植物及其产品的检测主要是基于核酸和蛋白质水平，如pcr、试纸条、酶联免疫检测技术(elisa)等，也有用仪器对cry毒素进行分析，如高效液相色谱法，但pcr和高效液相色谱法等检测方法操作复杂且耗时久，而elisa在cry毒素的检测中有着快速、准确、灵
3、因此，有必要开发一种方案改善上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种抗cry 1c的纳米抗体及其应用，改善pcr以及高效液相色谱仪器分析法在cry毒素检测方面存在的操作复杂且耗时久等问题。
2、一方面，本专利技术提供一种抗cry 1c的纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如seqid no.1所示，并将所述纳米抗体命名为c9。
3、优选地，所述纳米抗体的氨基酸序列包含4个框架区fr1、fr2、fr3、fr4和3个互补决定区cdr1、cdr2、cdr3。
4、优选地，所述纳米抗体的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.3所示；所述纳米抗体的互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述纳米抗体的互补决定区cdr3氨基酸序列如seq id no.5所示。
5、第二方面，本专利技术提供一种编码所述的纳米抗体的基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
6、第三方面，本专利技术提供一种包括所述抗cry 1c纳米抗体的文库构建方法，包括以下步骤：
7、将收集的羊驼cdna样本按照pcr扩增体系进行扩增，得到pcr产物；
8、将所述pcr产物插入噬菌体载体，并电转至感受态细胞，获得天然噬菌体纳米抗体展示文库；
9、对所述纳米文库进行噬菌体文库救援后测定库容量。
10、第四方面，本专利技术提供一种所述抗cry 1c纳米抗体在免疫学检测中的应用。
11、优选地，所述纳米抗体以蛋白的形式应用。
12、优选地，所述纳米抗体以原核表达的形式获取。
13、本专利技术的有益效果包括：
14、(1)本专利技术通过筛选出的纳米抗体文库为天然文库，相比于免疫库具有成本更低、不受抗原的抗原性限制，同时能够无需动物免疫即可富集得到特异性纳米抗体等优势。
15、(2)本专利技术筛选出的纳米抗体c9，具有4个框架区和3个互补决定区；框架区的结构序列相对保守，能够维持蛋白质结构的稳定；而互补决定区结构相对丰富多样，提供了与抗原cry 1c特异性结合位点。
16、(3)本专利技术筛选出的纳米抗体c9可通过基因工程技术将编码纳米抗体c9的基因，克隆至合适的原核表达载体，并通过原核表达完成蛋白表达，从而进行该纳米抗体的大量制备。
17、(4)本专利技术筛选出的纳米抗体c9可以应用于免疫学检测分析中，利用纳米抗体与抗原cry 1c的特异性结合，可应用于包括酶连免疫吸附检测、胶体金免疫层析、免疫杂交等基于抗原-抗体特异性反应的免疫分析检测类型，同时能够达到快速、准确、特异性强、灵敏度高等要求。
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1.一种抗Cry 1C纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列包含4个框架区FRI、FR2、FR3、FR4和3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3。
3.根据权利要求2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的互补决定区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述纳米抗体的互补决定区CDR2的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示；所述纳米抗体的互补决定区CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.一种编码如权利要求1所述的抗Cry 1C纳米抗体的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.一种如权利要求1所述的纳米抗体的文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.一种如权利要求1所述的纳米抗体在免疫学检测中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述纳米抗体以蛋白的形式应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述纳
...【技术特征摘要】
1.一种抗cry 1c纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列包含4个框架区fri、fr2、fr3、fr4和3个互补决定区cdr1、cdr2、cdr3。
3.根据权利要求2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的互补决定区cdr1的氨基酸序列如seq id no.3所示；所述纳米抗体的互补决定区cdr2的氨基酸序列如seq idno.4所示；所述纳米抗体的互补决定区cdr3氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：涂追，周萌萌，陈梦娜，罗颖，刘传勇，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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