【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物模型构建，尤其涉及一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型。
技术介绍
1、肿瘤终末期指肿瘤发生发展的最晚时期，常出现体内组织和器官的肿瘤扩散转移的情况。癌症是导致死亡的主要原因,转移性癌症是发展最晚期的疾病形式，通常是致命的。因此，了解肿瘤转移过程和相关的关键调控因子，以及最终找出阻断转移的策略是克服癌症的重要方法。即使对癌细胞来说，转移过程也是一个极其复杂和高度低效的过程，许多癌细胞中只有很少的细胞能成功地在远处定植。转移过程包括一系列主要步骤，主要包括五个过程：原位侵袭(local invasion)、肿瘤细胞内渗(intravasation)、循环系统存活(survivalin the circulation)、肿瘤细胞外渗(extravasation)、形成转移灶(micrometastasis formation)。癌细胞脱离肿瘤团块并穿透周围的间质是发生转移的第一步。黏附分子和机械挤压被认为在脱离肿瘤团块中起关键作用，但自发细胞脱离是如何发生的，其分子调控的研究较少。
2、含溴结构域蛋白4(brd4)是目前进行临床试验中的有前景的癌症治疗靶点。临床研究中，brd4抑制剂通过抑制brd4的功能达到抑制肿瘤发展的效果。但临床实验结果表明，个体差异巨大。这是由于brd4有两种亚型，brd4l和brd4s。目前brd4的抑制剂同时抑制brd4l(brd4 long,brd4长亚型和brd4short，brd4短亚型)的功能，但研究发现brd4l和brd4s的功能存在很大差
3、brd4的c末端低复杂结构域(lcd结构域)是brd4蛋白区别与其他bet蛋白家族成员的主要结构成分。而以往的研究里对于brd4-lcd的功能阐述并不明确。brd4的抑制剂诸如jq1和dbeti是作用于布罗莫(bd)结构域的药物，而布罗莫结构域是bet蛋白家族所共有的结构域，这也导致临床上广谱bet抑制剂对整个bet家族蛋白都产生抑制作用。因而作用于布罗莫结构域的抑制剂存在较大的副作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决现有技术中无法区分brd4l和brd4s功能的缺陷，通过敲除brd4l特有的外显子，改变brd4l和brd4s在细胞内的量。研究brd4l和brd4s在肿瘤中的作用，并理解功能差异的内在机制。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型，所述模型用于研究肿瘤的发生与发展。
4、优选的，缺失的外显子为人brd4的14号外显子或鼠brd4的15号外显子。
5、优选的，所述模型包括人brd4的14号外显子缺失的细胞系、鼠brd4的15号外显子缺失的细胞系及小鼠黑色素瘤细胞转移模型。
6、优选的，所述brd4的14号外显子缺失的细胞系是通过crispr-cas9技术在hek293t细胞里精确切割掉14号外显子获得的。
7、优选的，所述鼠brd4的15号外显子缺失的细胞系使用的是小鼠黑色素瘤细胞-b16。
8、优选的，所述小鼠黑色素瘤细胞转移模型采用皮下和腹腔两种方式进行造模。
9、优选的，小鼠黑色素瘤细胞转移模型具体构建方法如下：
10、在动物房饲养b6小鼠，保证动物舒适与健康，同时培养所需要的b16细胞系，所述b16细胞系为鼠brd4的15号外显子缺失的b16细胞系；
11、选取同周龄同性别的wt b6小鼠在注射等量肿瘤细胞。在注射前先在小鼠下腹部或皮下用酒精棉消毒，然后用枪头吹匀细胞悬液，用1ml注射器吸取悬液，注射入小鼠腹腔或皮下。
12、本申请中通过建立用于研究肿瘤发生发展的人brd4的不同外显子和鼠brd4对应的不同外显子缺失的稳定细胞系模型，长期研究不同外显子区域对于肿瘤的增殖、迁移、黏附、分化干性等细胞表型的影响。同时我们也可以方便用于一些细胞系长期的药物筛选。动物模型也适用于对于体内肿瘤较长期的转移研究。
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1.一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：所述模型用于研究肿瘤的发生与发展。
2.根据权利要求1所述的一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：缺失的外显子为人BRD4的14号外显子或鼠BRD4的15号外显子。
3.根据权利要求1所述的一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：所述模型包括人BRD4的14号外显子缺失的细胞系、鼠BRD4的15号外显子缺失的细胞系及小鼠黑色素瘤细胞转移模型。
4.根据权利要求3所述的一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：所述BRD4的14号外显子缺失的细胞系是通过CRISPR-CAS9技术在HEK 293T细胞里精确切割掉14号外显子获得的。
5.根据权利要求3所述的一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：所述鼠BRD4的15号外显子缺失的细胞系使用的是小鼠黑色素瘤细胞-B16。
6.根据权利要求3所述的一种研究
7.根据权利要求6所述的一种研究BRD4不同亚型功能及肿瘤发展的BRD4外显子缺失模型，其特征在于：所述小鼠黑色素瘤细胞转移模型具体构建方法如下：
...【技术特征摘要】
1.一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型，其特征在于：所述模型用于研究肿瘤的发生与发展。
2.根据权利要求1所述的一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型，其特征在于：缺失的外显子为人brd4的14号外显子或鼠brd4的15号外显子。
3.根据权利要求1所述的一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型，其特征在于：所述模型包括人brd4的14号外显子缺失的细胞系、鼠brd4的15号外显子缺失的细胞系及小鼠黑色素瘤细胞转移模型。
4.根据权利要求3所述的一种研究brd4不同亚型功能及肿瘤发展的brd4外显子缺失模型，其特征在于：所述b...
【专利技术属性】
技术研发人员：范义辉，马咏义，马舒燕，郑雯，毛仁芳，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：
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