【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于荧光探针，具体涉及一种嘌呤基荧光探针edph及其在检测硫化氢的含量或hela细胞成像上的应用。
技术介绍
1、众所周知，硫化氢(h2s)是一种有毒的气味气体，但同时它也是我们生活中必不可少的气体转移剂。这种气体分子在哺乳动物体内通过半胱氨酸(cys)及其衍生物的内源性代谢，在特定的酶的催化下产生。硫化氢分子参与了许多生理和病理过程，并在其中发挥了不可替代的作用。例如，当人体细胞中的h2s水平不正常时，可能引起各种疾病，如阿尔茨海默症、糖尿病、唐氏综合症和肝硬化。同时，h2s与线粒体功能密切相关。据报道，线粒体中会产生各种反应性物质，这种反应性物质会氧化人体的内部环境，造成紧急损害，而硫化氢的存在可以防止这种损害，从而起到保护细胞的作用。由此可见，为了阐明h2s的生物学作用，可视化h2s在生命系统中的分布和浓度非常重要。
2、有机小分子荧光探针以其独特的高灵敏度、实时成像和高时空分辨率，在检测各种物质方面具有良好的潜力。h2s荧光探针的设计是为了利用h2s的还原性或亲核性进行特定的化学反应。xu等人合成了一种含有二硫键的荧光探针。hong等人开发了一种新的反应性红近红外(nir)h2s荧光开启探针，使用2,4-二硝基苯基醚作为反应部位。erman等人首次使用亲电性氰酸酯作为h2s识别基团，开创了一种新的识别方法。然而，上述大多数探针需要复杂的合成方法和较长的反应时间。嘌呤是可以穿透细胞的荧光团。嘌呤及其衍生物不仅是许多生物和化学过程的宝贵合成物，而且由多个较大的平面共轭杂环组成，含有良好的荧光特性，因此广
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供了一种嘌呤基荧光探针edph及其在检测硫化氢的含量或hela细胞成像上的应用，该荧光探针edph是一种以嘌呤为母体且能快速检测硫化氢分子的希夫碱型荧光探针，其对硫化氢分子具有专一性识别，响应时间短以及灵敏度高等优点。
2、为解决现有技术问题，本专利技术采取的技术方案为：
3、一种嘌呤基荧光探针edph，其结构式如下所示：
4、
5、上述嘌呤基荧光探针edph的制备方法，包括以下步骤：
6、步骤1，取4,6-二氯-5-氨基嘧啶和1-萘胺加入到有机溶剂中，待固体溶解后加入浓盐酸，回流搅拌，待反应完全后，通过减压蒸馏除去有机溶剂，用naoh溶解，然后用乙酸乙酯进行萃取后，用减压蒸馏的方法除去乙酸乙酯，用甲醇与水重结晶，得到6-氯-n-(萘-1-基)嘧啶-4,5-二胺，即化合物ⅰ；
7、步骤2，将化合物ⅰ、萘甲酸、多聚磷酸和十二烷基三甲基氯化铵溶于三氯氧磷中，进行回流搅拌，待反应完全后，将反应液完全冷却至室温后，通过减压蒸馏除去有机溶剂，在冰水浴的条件下向反应体系中加入冰水混合物，纯化洗脱，抽滤除去水相得到6-氯-8,9-二(萘-1-基)-9h-嘌呤，即化合物ⅱ；
8、步骤3，将化合物ⅱ溶于乙醇后，待固体溶解后，加入水合肼，进行回流搅拌，待反应完全后，冷却至室温，减压蒸馏除去有机相，用有机溶剂冲洗固体，得到6-肼-8,9-二(萘-1-基)-9h-嘌呤，即化合物ⅲ；
9、步骤4，将3，5-二甲基-4-羟基苯甲醛和k2co3并溶于dmf中，在室温下搅拌30分钟后，加入2,4-二硝基氟苯，反应在室温下搅拌反应，反应结束后，加入200ml蒸馏水，用乙酸乙酯萃取，然后减压除去溶剂，再用乙酸乙酯重结晶后得到黄色晶体，即化合物ⅳ；
10、步骤5，将化合物ⅲ和化合物ⅳ溶解于有机溶剂中，并将混合物料进行回流搅拌，反应完成后，冷却至室温，减压蒸馏除去溶剂，将粗产物通过重结晶纯化，得到(e)-1-(4-(2,4-二硝基苯氧基)-3,5-二甲基苯亚甲基)-2-(8,9-二(萘-1)-9h-嘌呤-6-基)肼，即化合物edph。
11、本专利技术嘌呤基荧光探针edph的反应式如下所示：
12、
13、作为改进的是，步骤1中减压蒸馏的温度为45-55℃。
14、作为改进的是，步骤3中洗固体所用的有机溶剂为三氯甲烷。
15、作为改进的是，步骤4中所述的回流搅拌的温度为75℃，回流2h。
16、上述嘌呤基荧光探针edph在检测溶液中或细胞中硫化氢上的应用。
17、作为改进的是，硫化氢分子的检出限为41nmol/l。
18、上述嘌呤基荧光探针edph在hela细胞成像上的应用。
19、有益效果：
20、与现有技术相比，本专利技术一种嘌呤基荧光探针edph及其在检测硫化氢的含量或hela细胞成像上的应用，嘌呤基荧光探针edph以嘌呤环为荧光基团，水合肼和羟基为连接基团，合成了一种基于嘌呤母体硫化氢分子的荧光探针，该制备方法原料易得，方法简单，所得产品为固体粉末，易于存储，稳定性好；选用嘌呤类衍生物为钢性平面，具有生物毒性低等优点。该荧光探针对硫化氢分子具有专一性识别，响应时间短，灵敏度高，对溶液和细胞中痕量硫化氢分子表现出高灵敏度和高选择性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种嘌呤基荧光探针EDPH，其特征在于，所述嘌呤基荧光探针EDPH的结构式如下所示：。
2.基于权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH的制备方法，其特征在于，步骤1中减压蒸馏的温度为45-55℃。
4.根据权利要求2所述的权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求2所述的权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH的制备方法，其特征在于，
6.基于权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH在检测溶液中或细胞中硫化氢上的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，硫化氢分子的检出限为41nmol/L。
8.基于权利要求1所述的嘌呤基荧光探针EDPH在Hela细胞成像上的应用。
【技术特征摘要】
1.一种嘌呤基荧光探针edph，其特征在于，所述嘌呤基荧光探针edph的结构式如下所示：。
2.基于权利要求1所述的嘌呤基荧光探针edph的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的权利要求1所述的嘌呤基荧光探针edph的制备方法，其特征在于，步骤1中减压蒸馏的温度为45-55℃。
4.根据权利要求2所述的权利要求1所述的嘌呤基荧光探针edph...
【专利技术属性】
技术研发人员：王安冠，蒋春辉，陈旭，毛艳霞，陆鸿飞，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。