【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品安全免疫检测，更具体的说是涉及一种海洋功能性食品中甲苯磺丁脲的快速检测方法。
技术介绍
1、从食品安全管理部门公布近年来食品安全监督抽检数据发现，食品中滥用食品添加剂和非法添加药物的案例时有发生，尤其是在保健食品中。这与与日俱增的食品和制药公司在功能性食品和保健食品的布局有关，包括块状、胶囊或片剂的营养品、强化营养粉、补充剂的功能性饮料和牛奶，甚至水。其中海洋保健食品又是以纯粹海洋保健食物、功能因子及主要成分形成的，近年来深受研发人员与广大消费者青睐的一类保健食品。甲苯磺丁脲(tolbutamide，tol)，别名n-(丁基氨基甲酰基)-4-甲基苯磺酰胺，是一种磺酰脲类口服降血糖药，对正常人和糖尿病患者均有降血糖作用，主要作用为刺激胰岛β细胞分泌胰岛素。因此，一些不法商家因受利益驱动，利用群众对保健食品的信赖，往保健食品中非法添加甲苯磺丁脲。
2、为了规范辅助降血糖类保健食品的检测，国家市场监督管理总局于2017年发布了《保健食品中75种非法添加化学药物的检测》食品补充检验方法。目前甲苯磺丁脲的检测方法主要分为仪器分析方法，包括毛细管电泳法(capillary electrophoresis,ce)、高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,hplc)和液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandemmass spectrometry,lc-ms/ms)等。已有的方法具有灵敏度高、检测限低、可比性和重复性好等优点，但存在检
3、因此，提供一种海洋功能性食品中甲苯磺丁脲的快速检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种海洋功能性食品中甲苯磺丁脲的快速检测方法，涉及甲苯磺丁脲人工抗原合成方法及其单克隆抗体的制备和应用，以解决现有检测甲苯磺丁脲设备昂贵、样品前处理复杂、检测成本高等问题。
2、本专利技术建立了一种高效快速、特异性强的免疫分析检测方法检测甲苯磺丁脲，在保健食品安全性方面具有重要意义。
3、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
4、一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号为cgmccno.45719，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称cgmcc，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2023年09月15日，分类命名为单克隆抗体细胞株tbtm。
5、进一步，所述的一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株在制备检测甲苯磺丁脲试剂中的应用。
6、进一步，一种甲苯磺丁脲的半抗原，所述半抗原的结构式为：
7、
8、进一步，一种甲苯磺丁脲人工抗原，所述人工抗原的结构式为：
9、
10、pro代表载体蛋白；所述载体蛋白选自牛血清白蛋白bsa、卵清蛋白ova、钥孔血蓝蛋白klh、乳铁蛋白lf、甲状腺蛋白tg或人血清白蛋白hsa。
11、甲苯磺丁脲人工抗原包括甲苯磺丁脲免疫原和甲苯磺丁脲包被原，所述甲苯磺丁脲免疫原由半抗原与钥孔血蓝蛋白偶联所得，其结构式如下：
12、
13、所述甲苯磺丁脲包被原由半抗原与牛血清白蛋白偶联所得，其结构式如下：
14、
15、进一步，一种甲苯磺丁脲单克隆抗体，由以下方法制备而成：
16、a、由所述的杂交瘤细胞株分泌产生；
17、或b、利用所述的甲苯磺丁脲人工抗原制备而成。
18、进一步，所述的一种甲苯磺丁脲单克隆抗体的以下任一应用：
19、1)在检测甲苯磺丁脲中的应用；
20、2)在制备检测甲苯磺丁脲试剂中的应用；
21、3)在制备甲苯磺丁脲的免疫层析试纸条(胶体金、荧光等)中的应用。
22、进一步，一种检测甲苯磺丁脲的试剂盒，包括所述的杂交瘤细胞株或所述的甲苯磺丁脲人工抗原或所述的单克隆抗体。
23、进一步，所述的试剂盒在检测甲苯磺丁脲中的应用。
24、进一步，一种海洋功能性食品中甲苯磺丁脲的快速检测方法，利用所述的试剂盒进行检测。
25、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种甲苯磺丁脲的快速检测方法，通过合成制备的甲苯磺丁脲半抗原、人工抗原，从而制备得到一种甲苯磺丁脲单克隆抗体，该抗体对甲苯磺丁脲的检测具有灵敏度高、特异性强的优点，其半抑制浓度为4.66ng/ml，定量检测范围为2.11～10.28ng/ml，检测限为1.33ng/ml，对其他降血糖药的交叉反应率低于1％，为建立甲苯磺丁脲的免疫检测方法提供了核心试剂。此外，本专利技术利用该甲苯磺丁脲抗体建立了一种甲苯磺丁脲胶体金免疫层析试纸条的检测方法，该方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短、成本低等优点，可视检测线为50ng/ml，适用于现场大批量样品的快速筛选，满足在线快速检测食品原料甲苯磺丁脲含量，在食品生产中具有重要意义。
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1.一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.45719，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株在制备检测甲苯磺丁脲试剂中的应用。
3.一种甲苯磺丁脲的半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式为：
4.一种甲苯磺丁脲人工抗原，其特征在于，所述人工抗原的结构式为：
5.一种甲苯磺丁脲单克隆抗体，其特征在于，由以下方法制备而成：
6.权利要求5所述的一种甲苯磺丁脲单克隆抗体的以下任一应用：
7.一种检测甲苯磺丁脲的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求4所述的甲苯磺丁脲人工抗原或权利要求5所述的单克隆抗体。
8.权利要求7所述的试剂盒在检测甲苯磺丁脲中的应用。
9.一种海洋功能性食品中甲苯磺丁脲的快速检测方法，其特征在于，利用权利要求7所述的试剂盒进行检测。
【技术特征摘要】
1.一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为cgmccno.45719，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.根据权利要求1所述的一株分泌甲苯磺丁脲单克隆抗体的杂交瘤细胞株在制备检测甲苯磺丁脲试剂中的应用。
3.一种甲苯磺丁脲的半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式为：
4.一种甲苯磺丁脲人工抗原，其特征在于，所述人工抗原的结构式为：
【专利技术属性】
技术研发人员：周升阳，张业辉，刘俊，张友胜，焦文娟，赵甜甜，刘伟峰，周芳，
申请(专利权)人：广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：
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