【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及外源性mir156a吸收序列(sponge)载体及以其构建转基因动物模型的方法。
技术介绍
1、微小核糖核酸(microrna，mirna)是一类长约22个核苷酸的非编码rna，是真核生物中最短的具有生物功能的非编码rna。动物mirna的转录绝大多数是由rna polymeraseii完成的。mirna转录最初形成的产物称为mirna初始转录本(primary mirna，简称pri-mirna)，长度达数千nt，并且内部具有茎环结构。pri-mirna在细胞核中进一步经核糖核酸酶iii(rnase iii)型核酸内切酶drosha切割，形成长约70-90nt的pre-mirna，由于drosha酶交错切割rna双链，因此pre-mirna有5′端磷酸基团和3′端两个碱基的突出。随后pre-mirna被5'-三磷酸鸟苷ran-gtp和输出受体exportin-5从细胞核转运至细胞质，经另一种rnase iii型核酸内切酶dicer切割，形成一个19-23nt成熟的mirna，mirna通过种子序列与靶基因mrna结合，抑制mrna的翻译。植物mirna的生成和作用机制与动物mirna有所不同，植物pri-mirna在细胞核中经dicer类似物(dicer-like)dcl1两次切割形成成熟体mirna，通常植物成熟体mirna的3′端进一步被hen1甲基转移酶甲基化，以增加其稳定。根据植物mirna与靶mrna近似完全配对，导致靶mrna被切割降解，引发基因沉默。
2、mirna在
技术实现思路
1、为解决以上问题，本专利技术提供了外源性mir156a吸收序列载体及以其构建转基因动物模型的方法。本专利技术所指的转基因动物为转基因非人动物。
2、本专利技术中，mir156a来源于植物，mir156a序列如seq id no.3所示，5′-ugacagaagagagugagcac-3′。
3、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
4、本专利技术首先提供一种表达盒，所述表达盒依次包含启动子、表位标记和外源性mir156a吸收序列，所述表位标记和所述外源性mir156a吸收序列的转录由所述启动子驱动，所述外源性mir156a吸收序列包含mir156a互补序列的4～7次重复序列。
5、具体的，所述外源性mir156a吸收序列包含6次重复mir156a互补序列。
6、具体的，所述启动子为cmv启动子，其序列如序列表seq id no.1所示，5’-tgaattcaaggtaccagatcttagttattaatagtaatcaattacgggg tcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctggtttagtgaaccg-3’。本专利技术中cmv启动子为全身表达的启动子，它能够调控mir156a sponge在转基因动物体内组织器官，如肝、肺、肾、胃、大肠等组织中的表达。所述表位标记为荧光素酶，其序列如序列表seqid no.2所示，5’-tggatccaccatggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatcctctagaggatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtgaacatcacgtacgcggaatacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgttgggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgaacatttcgcagcctaccgtagtgtttgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaaattaccaataatccagaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtaccagagtcctttgatcg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒依次包含启动子、表位标记和外源性miR156a吸收序列，所述表位标记和所述外源性miR156a吸收序列的转录由所述启动子驱动，所述外源性miR156a吸收序列包含miR156a互补序列的4～7次重复序列。
2.根据权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述启动子为CMV启动子，其序列如序列表SEQ ID No.1所示，所述表位标记为荧光素酶，其序列如序列表SEQ ID No.2所示。
3.根据权利要求1或2所述的表达盒的相关生物材料，其特征在于，包括以下材料中的任一种：
4.一种构建miR156a吸收序列转基因动物模型的方法，其特征在于，包括将权利要求3中C1所述载体导入动物的受精卵或胚胎干细胞中，将所述受精卵或所述胚胎干细胞培养得到所述转基因动物模型。
5.根据权利要求4所述的构建miR156a吸收序列转基因动物模型的方法，其特征在于，所述动物为啮齿动物。
6.根据权利要求4或5所述的构建miR156a吸收序列转基因动物模型的方法，其特征在于，所述动物为小鼠。
7.如下Y
...【技术特征摘要】
1.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒依次包含启动子、表位标记和外源性mir156a吸收序列，所述表位标记和所述外源性mir156a吸收序列的转录由所述启动子驱动，所述外源性mir156a吸收序列包含mir156a互补序列的4～7次重复序列。
2.根据权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述启动子为cmv启动子，其序列如序列表seq id no.1所示，所述表位标记为荧光素酶，其序列如序列表seq id no.2所示。
3.根据权利要求1或2所述的表达盒的相关生物材料，其特征在于...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。