【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鸡pml的检测，具体涉及一种抗鸡pml单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、病毒是严格细胞内寄生微生物，需要依附于宿主细胞实现基因复制和蛋白合成进而完成病毒复制周期。在长期的共同进化过程中，宿主细胞为维持自身稳态而形成了一系列天然抗病毒机制。早幼粒细胞白血病蛋白核体（promyelocytic leukemia proteinnuclear bodies, pml核体或pml nbs）是脊椎动物细胞中普遍存在的一种动态的亚细胞核结构。sumo化的早幼粒细胞白血病蛋白（promyelocytic leukemia protein, pml）、可溶性酸性磷酸化核蛋白（sp100）、死亡结构域相关蛋白（death domain associate protein,daxx）是pml nbs的主要组成性成分。pml nbs通过招募不同的配体分子发挥多种生物学功能，如抗病毒感染、细胞分化、增殖、凋亡以及dna修复等。pml基因启动子中含有isre和gas，可以在ifn诱导下上调转录和翻译，导致细胞核内pml nbs数量增加和体积增大，在核内向dna病毒基因复制区块移动，通过修饰病毒基因组来抑制其复制与转录。
2、pml nbs在疱疹病毒的潜伏感染形成以及早期宿主抵抗疱疹病毒复制过程中发挥重要作用。pml nbs的内源性抗病毒活性也最早在研究疱疹病毒感染机制时被发现。单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus 1, hsv-1）进入宿主细胞后，pml nbs识别并结合裸露的病毒dna，形成包含病毒dn
3、与此同时，研究发现疱疹病毒在感染过程中为了克服pml nbs的这种抗病毒作用实现生产性感染和潜伏感染再活化过程，可以通过自身编码蛋白抑制pml nbs的装配和细胞亚定位，破坏其抑制病毒dna复制的能力，促进病毒的增殖。例如在细胞感染早期，hsv-1早期蛋白icp0可以在感染后与pml nbs在细胞核内共定位然后破坏其结构，使病毒dna从pml nbs上脱落。人巨细胞病毒（humancytomegalovirus, hcmv）进入生产性感染阶段后其编码蛋白ie1可以通过其core区域竞争性地结合在pml的coil-coil结构域，导致pml蛋白c端去sumo化修饰，该位点的去sumo化可以直接阻断pml入核参与pml nbs装配，进而抑制pmlnbs的抗病毒活性。eb病毒（epstein-barr virus, ebv）编码蛋白bzlf-1通过本身的sumo化修饰竞争性地抑制pml分子的sumo化修饰，抑制其入核参与pml nbs的形成，从而使得ebv可以逃避机体的这种抗病毒反应而维持生产性感染。可见不同疱疹病毒感染过程中立即早期蛋白在抑制宿主pml nbs抗病毒活性，维持病毒生产性复制、潜伏-再活化过程中起到了关键作用，但不同疱疹病毒抑制pml nbs装配的分子机制存在较大差异。
4、马立克氏病病毒（marek’s disease virus, mdv）属于α疱疹病毒亚科，具备疱疹病毒“潜伏-再活化”的感染特性，感染鸡后诱发淋巴细胞增生性肿瘤并伴随严重的免疫抑制。目前，养殖业中普遍使用mdv弱毒活疫苗控制该病。由于感染过程中mdv逃逸宿主天然抗病毒反应的机制尚不明确，接种常规弱毒疫苗后免疫失败时有发生，而且选择压力导致mdv流行株毒力不断增强，为马立克氏病的防控提出了挑战，威胁养鸡业的健康发展。
5、鸡pml以及pml nbs的功能目前尚未有报道，且鸡pml检测方法的缺失导致目前无法开展鸡pml nbs抗病毒反应的研究工作。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是准确检测细胞内鸡pml或鸡pml核体（pml nbs）。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗鸡pml单克隆抗体，其由保藏编号为cgmcc no. 45710的杂交瘤细胞所分泌。
3、还提供分泌抗鸡pml单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为cgmcc no. 45710。
4、还提供用于检测鸡pml或鸡pml核体的试剂盒，其包含所述的抗鸡pml单克隆抗体。
5、优选地，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠igg抗体。
6、优选地，所述抗小鼠igg抗体由荧光基团标记。
7、优选地，所述试剂盒还包含免疫荧光法检测通用试剂。
8、所述的抗鸡pml单克隆抗体在制备用于检测鸡pml或鸡pml核体的产品中的应用也属于本专利技术的保护范围。
9、所述的抗鸡pml单克隆抗体在检测鸡pml或鸡pml核体中的应用也属于本专利技术的保护范围。
10、上述应用中，所述检测优选为免疫荧光法检测。
11、还提供一种检测细胞内鸡pml或鸡pml核体的方法，其包括如下步骤：
12、（1）取待测细胞，用多聚甲醛固定；
13、（2）去除多聚甲醛，用pbs洗涤细胞后加入表面活性剂进行处理；
14、（3）去除表面活性剂，用pbs洗涤细胞后加入bsa封闭液进行封闭；
15、（4）去除bsa封闭液，加入所述的抗鸡pml单克隆抗体进行孵育；
16、（5）去除抗鸡pml单克隆抗体，用pbst洗涤细胞后加入荧光基团标记的抗小鼠igg抗体进行孵育；
17、（6）去除抗小鼠igg抗体，用pbst洗涤细胞后加入dapi染色液进行孵育；
18、（7）去除dapi染色液，用pbst和去离子水依次洗涤细胞，封片后置于激光共聚焦显微镜下观察细胞中荧光的有无和数量。
19、本专利技术首次克隆了鸡pml基因，截短表达后制备了高纯度蛋白，并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备了抗鸡pml单克隆抗体。基于该单克隆抗体，本专利技术建立了一种全新的检测鸡pml核体（pml nbs）的荧光检测方法。经实验证明，通过该方法可直观检测鸡源细胞中的pmlnbs的形态和亚细胞定位（图8-10）。我们的研究结果表明，在鸡胚成纤维细胞中过表达外源性pml后，细胞核中组装的pml nbs比内源性pml nbs的体积更大（图9），马立克氏病病毒（mdv）感染后细胞核内pml nbs数量比未感染细胞显著减少（p＜0.05），说明mdv感染后会显著抑制细胞中pml nbs的组装（图10）。因此，鸡源细胞内的pml nbs数量可用作检测细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗鸡PML单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No. 45710的杂交瘤细胞所分泌。
2.分泌抗鸡PML单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC No. 45710。
3.用于检测鸡PML或鸡PML核体的试剂盒，其包含权利要求1所述的抗鸡PML单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠IgG抗体。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗小鼠IgG抗体由荧光基团标记。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含免疫荧光法检测通用试剂。
7.权利要求1所述的抗鸡PML单克隆抗体在制备用于检测鸡PML或鸡PML核体的产品中的应用。
8.权利要求1所述的抗鸡PML单克隆抗体在检测鸡PML或鸡PML核体中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测为免疫荧光法检测。
10.一种检测细胞内鸡PML或鸡PML核体的方法，其包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.抗鸡pml单克隆抗体，其由保藏编号为cgmcc no. 45710的杂交瘤细胞所分泌。
2.分泌抗鸡pml单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为cgmcc no. 45710。
3.用于检测鸡pml或鸡pml核体的试剂盒，其包含权利要求1所述的抗鸡pml单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含用作二抗的抗小鼠igg抗体。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗小鼠igg抗体由...
【专利技术属性】
技术研发人员：江波，李永清，曹梦瑶，王晶，程晶，刘文晓，周林宜，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：
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