【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类免疫学，具体涉及一种高效分离鱼类免疫球蛋白igt的方法。
技术介绍
1、机体的免疫系统正常运作时可以抵抗大多数病原的入侵。脊椎动物的免疫可以分为先天性免疫和适应性免疫。先天性免疫主要依靠机体内外部屏障系统、先天性免疫细胞及体液中存在的抗菌与抗病毒成分来发挥作用，而适应性免疫则是通过t细胞受体和b细胞受体来识别抗原，继而引发适应性细胞免疫和体液免疫(张永安.专家约稿硬骨鱼类特有免疫球蛋白igt的研究进展[j].大连海洋大学学报,2022(002):037.)。
2、免疫球蛋白是免疫系统的重要组成部分，目前硬骨鱼类中已经鉴定出了igm、igd、igt三种免疫球蛋白。不同的免疫球蛋白的抗体可以用来标记不同类型的b细胞，从而更深层次的了解鱼类的免疫系统。
3、目前关于鱼类免疫球蛋白的分离主要以亲和层析方法(a a l,a r t,b s k,etal.serum igm heavy chain sub-isotypes and light chain variants revealed ingiant grouper(epinephelus lanceolatus)via protein a affinity purification,mass spectrometry and genome sequencing[j].fish&shellfish immunology,2021,113:42-50.doi:10.1016/j.fsi.2021.03.014.)、硫酸铵沉淀法(li q,
4、鱼类血清中的免疫球蛋白按分子量大小排序分别为igm、igd、igt，研究表明硬骨鱼乌鳢的血清中igm浓度在800-13000μg/ml；igd的浓度在2-40μg/ml；igt在虹鳟鱼血清中的浓度为3.7μg/ml(李昕彤.乌鳢igt调节肠道炎症性损伤的机制研究[d].吉林农业大学,2023.doi:10.27163/d.cnki.gjlnu.2022.000037)。即从鱼类血清中分离的免疫球蛋白以igm为主，而igt和igd的含量很低。目前关于鱼类igt和igd的纯化仅有使用特异性抗体作为填料，但其可重复性和可再生性有限，而且必须要有特异性较高的抗体才能分离得到较纯的igt和igd。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的一个目的是提供一种高效分离鱼类免疫球蛋白igt的方法，所提供的方法能够获得更高含量的免疫球蛋白igt，以便进行后续免疫学实验。
2、本专利技术所提供的分离鱼类免疫球蛋白igt的方法，包括如下的步骤：
3、1)将硬骨鱼的血液凝固后，收集析出的血清，并将获得的血清与结合缓冲液混匀后作为样品液备用；
4、更进一步的，所述的血清在与结合缓冲液混匀前先进行离心处理，
5、所述的结合缓冲液，是包含有0.15m nacl、0.025m nah2po4和0.025m na2hpo4的水溶液，其ph为7.2。
6、所述的血清与结合缓冲液的体积比为4:1；
7、2)将制备的样品液注入预先使用结合缓冲液进行清洗的分子筛柱中，用结合缓冲液孔继续以1ml/分钟的流速清洗分子筛柱，至总体积为40ml时开始收集洗脱液作为蛋白样品溶液，
8、所述的分子筛柱，为hiprep 26/60sephacryl s-300hr柱；
9、3)将蛋白样品溶液注入protein l纯化柱后，洗脱缓冲液以1ml每分钟的流速洗脱，洗脱的液体使用添加了1.5m tris-hcl的10ml离心管进行收集，收集的液体为包含有高含量igt的免疫球蛋白溶液。
10、所述的洗脱缓冲液是ph为3的0.1m柠檬酸钠溶液。
11、本专利技术提供的方法，将鱼类血清经过两次纯化后得到纯度较高、活性较好的天然igm和igt。相较于之前报道的鱼类免疫球蛋白的纯化方法，可以分离出更多种类的免疫球蛋白。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种分离鱼类免疫球蛋白IgT的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的1)中血清在与结合缓冲液混匀前先进行离心处理。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的1)中的结合缓冲液是包含有0.15MNaCl、0.025M NaH2PO4和0.025M Na2HPO4的水溶液。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的结合缓冲液的pH为7.2。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的1)中血清与结合缓冲液的体积比为4:1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的2)中所述的分子筛柱为HiPrep 26/60Sephacryl S-300HR柱。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3)中的洗脱缓冲液是0.1M的柠檬酸钠溶液。
【技术特征摘要】
1.一种分离鱼类免疫球蛋白igt的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的1)中血清在与结合缓冲液混匀前先进行离心处理。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的1)中的结合缓冲液是包含有0.15mnacl、0.025m nah2po4和0.025m na2hpo4的水溶液。
4.如权利要求3所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢婧，林天雯，战文斌，唐小千，绳秀珍，迟恒，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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