【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及表面增强拉曼散射和免疫层析检测，具体涉及一种拉曼免疫探针和sers-纳米金免疫层析试纸及其应用。
技术介绍
1、通过对疾病标志物的检测可以快速对患者的患病情况进行诊断。例如，甲胎蛋白(afp)是一种肿瘤标志物蛋白，健康人群的afp血清浓度较低，通常不超过25ng/ml，而在肝硬化和肝细胞癌患者中，afp血清水平急剧增加，一般会达到400ng/ml及以上。
2、虽然目前对于afp等疾病标志物蛋白的检测手段很多，如，酶联免疫吸附法、免疫印迹法、液相色谱-质谱联用法等，但是这些方法通常成本较高，而且依赖于较为昂贵或体积较大难以搬动的专业仪器和专业检测人员。免疫层析检测(lfa)是一种经济实惠、操作简单的检测方法，但是目前对于疾病标志物的免疫层析检测普遍具有灵敏度不高、无法定量检测等缺陷。
3、表面增强拉曼光谱(sers)的主要特点之一是具有极高的检测灵敏度，检测限可以低至单分子水平，而且其采用便携式拉曼光谱仪等易于携带的小型设备就可以实现检测。通过sers和lfa相结合，能够实现对疾病标志物蛋白的简单、快速、准确的检测。
4、目前sers检测中，通常采用纳米金球作为比色信号报告物，但是其sers信号仍有待提高。虽然纳米金棒、纳米金双锥等具有特殊结构的纳米金粒子能够具有更强sers信号，但是直接采用抗体对其进行修饰时常会导致纳米材料的聚沉，难以用于制备sers-lfa试纸。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的现有的s
2、为了实现上述目的，本专利技术一方面提供一种拉曼免疫探针，所述拉曼免疫探针包括带有负电荷的金纳米双锥，以及修饰在所述带有负电荷的金纳米双锥上的特异性结合目标检测物的抗体ab1和信号标记分子。
3、本专利技术第二方面提供一种拉曼免疫探针的制备方法，所述方法包括：
4、(1)合成带有负电荷的金纳米双锥；
5、(2)采用特异性结合目标检测物的抗体ab1和信号标记分子修饰步骤(1)获得的带负电荷的金纳米双锥。
6、本专利技术第三方面提供一种表面增强拉曼光谱-纳米金免疫层析试纸，所述试纸包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区，其中，所述结合物区包括结合垫，所述结合垫包含拉曼免疫探针，所述拉曼免疫探针为第一方面所述的拉曼免疫探针或根据第二方面所述的方法制备获得的拉曼免疫探针。
7、本专利技术第四方面提供第一方面所述的拉曼免疫探针，或者根据第二方面所述的方法制备获得的拉曼免疫探针，或者第三方面所述的表面增强拉曼光谱-纳米金免疫层析试纸在生物标志物蛋白检测中的应用，尤其是在肿瘤标志物蛋白检测中的应用。
8、通过上述技术方案，本专利技术至少能够取得如下有益效果：
9、(1)本专利技术提供的拉曼免疫探针中采用表面带有负电荷的金纳米双锥替代了现有的sers-lfa试纸中常用的金纳米球作为比色信号报告物，在提高sers信号的同时，还避免了常规金纳米双锥进行抗体修饰时容易大量团聚的问题。
10、(2)采用本专利技术提供的拉曼免疫探针制备的sers-纳米金免疫层析试纸兼具纳米金免疫层析试纸的便携性和sers检测的高灵敏性，并且，通过采用便携式拉曼光谱仪等小型设备即可实现样品的高精准度和高准确性现场定量检测，对于检测人员的专业水平要求较低，可以快速、准确、经济地实现疾病标志物蛋白的检测。
11、(3)本专利技术提供的拉曼免疫探针的用途和使用方式广泛，应用前景十分广阔。其中采用该拉曼免疫探针制备的sers-纳米金免疫层析试纸还具有使用方法简单，易于操作，大幅降低了对检测仪器、实验场地和人员的专业要求，适合在基层推广应用。
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1.一种拉曼免疫探针，其特征在于，所述拉曼免疫探针包括带有负电荷的金纳米双锥，以及修饰在所述带有负电荷的金纳米双锥上的特异性结合目标检测物的标记抗体Ab1和信号标记分子。
2.根据权利要求1所述的拉曼免疫探针，其中，所述带有负电荷的金纳米双锥包括金纳米双锥和覆盖在其表面提供负电荷的物质，优选所述提供负电荷的物质选自鱼精DNA、聚丙乙烯磺酸和柠檬酸配体中的至少一种，优选为鱼精DNA；优选所述金纳米双锥的粒径为80-120nm，长径比为2-5；
3.一种拉曼免疫探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(1)包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(1-1)中，所述种子生长法中，采用十六烷基三甲基溴化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵作为配体；
6.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(2)包括：
7.根据权利要求6所述的方法，其中，步骤(2-1)中，所述第二接触的方式包括：在pH7.5-8.5，温度20-30℃的条件下静置20-60min；
8.一种表面增
9.根据权利要求8所述的表面增强拉曼光谱-纳米金免疫层析试纸，其中，所述结合垫采用硝酸纤维素膜制成；
10.权利要求1或2所述的拉曼免疫探针，或者根据权利要求3-7中任意一项所述的方法制备获得的拉曼免疫探针，或者权利要求8或9所述的表面增强拉曼光谱-纳米金免疫层析试纸在生物标志物蛋白检测中的应用，尤其是在肿瘤标志物蛋白检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种拉曼免疫探针，其特征在于，所述拉曼免疫探针包括带有负电荷的金纳米双锥，以及修饰在所述带有负电荷的金纳米双锥上的特异性结合目标检测物的标记抗体ab1和信号标记分子。
2.根据权利要求1所述的拉曼免疫探针，其中，所述带有负电荷的金纳米双锥包括金纳米双锥和覆盖在其表面提供负电荷的物质，优选所述提供负电荷的物质选自鱼精dna、聚丙乙烯磺酸和柠檬酸配体中的至少一种，优选为鱼精dna；优选所述金纳米双锥的粒径为80-120nm，长径比为2-5；
3.一种拉曼免疫探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
4.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(1)包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(1-1)中，所述种子生长法中，采用十六烷基三甲基溴化铵和/或十六烷基三甲基氯化铵作为配体；
6.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤(2)包括：
【专利技术属性】
技术研发人员：王悦靓，李静，郭隆华，姚媛媛，陈丽芬，林丙永，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：
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