【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于土壤代谢物检测，具体涉及一种烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法及应用。
技术介绍
1、植物根系土壤中分布着大量的微生物，根系微生物和植物互生互利，植物为根系微生物提供碳源、氮源以及其他营养物质，根系微生物帮助植物更好地吸收土壤中的矿物质并提供大量促进植物生长的激素等物质，同时占据有效生态位，具有防御病原菌侵害等作用。因此，根系土壤代谢物受到土壤条件、作物生长以及病原侵染等多种因素的影响，是植物和土壤生物组合对生物和非生物因子的响应。
2、通过对土壤代谢物的检测，能够明确根系土壤代谢物的组成及含量，并对其进行分析，可以揭示土壤以及与土壤生态系统表型相关的微生物、植物等生物体生理状态，进一步鉴别不同土壤微生物群落特征，反映微生物基因组与环境的相关作用，从而科学评价病害土壤及健康土壤，探讨判别病害土壤代谢标志物。
3、李晓辉等在2019年5月公开的《烟草抗南方根结线虫病的生理生化反应与分子机制研究》一文中，以根部样品对研究对象，提取南方根结线虫侵染前后烟草根系的代谢产物进行lc/ms分析，并结合代谢组学中的主成分分析，筛选出抗、感品种显著差异代谢物及其参与的信号途径，从而进一步揭示南方根结线虫侵染烟草的致病机理和品种的抗性机制，为更好的防治南方根结线虫提供理论依据。
4、但上述研究并不是对烟草根系土壤中的代谢物进行研究，也未关注土壤中大极性代谢物组分的检测，且存在代谢物检出种类少而不能全面反映代谢物组分的问题。
技术实现思路
1、本专
2、本专利技术的第二个目的在于提供所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法的应用，解决现有技术中由于烟草根系土壤中大极性代谢物的检测方法检出种类少、全面性差导致的差异代谢物定性分析不准确的问题。
3、为实现上述目的，本专利技术的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法的技术方案是：
4、一种烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，包括以下步骤：1)将烟草根系土壤在提取剂中进行代谢物提取，静置后取上清液进行干燥得到干燥样品；2)在干燥样品中加入有机溶剂复溶，得到待检测样品；3)对待检测样品进行lc-ms检测，所述检测时使用的色谱柱为waters cortecs uplc c18色谱柱。
5、本专利技术提供的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，通过在检测时使用waterscortecs uplc c18色谱柱，能够极大提高土壤中大极性代谢物组分的分离效果，提高大极性代谢物的检出峰的数量和强度，进而提高检测准确性。
6、本专利技术提供的检测方法，采用非靶标全成分分析，能够检测到烟草根系土壤中的3000余种大极性代谢物组分，主要为多糖类和脂质类，检测大极性代谢的物种类和准确度大幅提高，且检测方法简单高效，可靠性强、稳定性好。
7、为了进一步提高土壤中大极性代谢物组分的提取效率，优选地，所述提取剂为甲醇氯仿混合溶剂，所述甲醇氯仿混合溶剂中的甲醇和氯仿的体积比为1:1～2。更优选地，所述提取剂为甲醇氯仿混合溶剂，所述甲醇氯仿混合溶剂中的甲醇和氯仿的体积比为1:1。
8、为了进一步提高大极性代谢物的提取量，优选地，所述烟草根系土壤与提取剂的质量比为1:(4.5～5.5)，更优选地，烟草根系土壤与提取剂的质量比为1:5。
9、为了使大极性代谢更多、更快地被提取剂提取出来，进一步提高检测的色谱峰数量和分离度，优选地，所述提取为在超声条件下提取25～35min。
10、为了进一步提高大极性代谢物与其他组分的分离程度，优选地，所述静置为在0～5℃环境下静置20～26h。
11、为了进一步降低其他代谢物组分对测试准确度的影响，优选地，所述步骤2)中复溶后在0～5℃进行下离心，离心转速为12000～15000rpm，离心时间为8～12min，取上清液即为待检测样品。更优选地，复溶后在4℃进行下离心，离心转速为14000rpm，离心时间为10min。
12、为了进一步提高不同大极性代谢物组分的分离效果，优选地，所述lc-ms检测时的流动相包括流动相a和流动相b，流动相a为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相b为体积分数为0.1％甲酸的乙腈溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
13、为了进一步提高烟草根系土壤样品中代谢物的保持率，优选地，所述烟草根系土壤在提取前进行真空冷冻干燥。
14、本专利技术的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法的应用的技术方案是：
15、一种烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法的应用，包括以下步骤：利用所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法检测两种及以上土壤样本的代谢物，确定不同样本的差异化合物。
16、本专利技术提供的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法的应用，利用所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法检测不同的土壤样本，确定样本间的差异化合物，能够得到316个定性可靠的差异代谢物，得到的差异代谢物可靠性强，准确性高，能够更为精准地用于下一步进行差异代谢通路分析，有助于理解在差异样品中代谢途径变化机制。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将烟草根系土壤在提取剂中进行代谢物提取，静置后取上清液进行干燥得到干燥样品；2)在干燥样品中加入有机溶剂复溶，得到待检测样品；3)对待检测样品进行LC-MS检测，所述检测时使用的色谱柱为Waters CORTECS UPLC C18色谱柱。
2.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述提取剂为甲醇氯仿混合溶剂，所述甲醇氯仿混合溶剂中的甲醇和氯仿的体积比为1:1～2。
3.如权利要求1或2所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述烟草根系土壤与提取剂的质量比为1:(4.5～5.5)。
4.如权利要求1或2所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述提取为在超声条件下提取25～35min。
5.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述静置为在0～5℃环境下静置20～26h。
6.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在
7.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述LC-MS检测时的流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为体积分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为体积分数为0.1％甲酸的乙腈溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
8.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法，其特征在于，所述烟草根系土壤在提取前进行真空冷冻干燥。
9.一种如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法的应用，其特征在于，包括以下步骤：利用所述的烟草根系土壤代谢物的LC-MS检测方法检测两种及以上土壤样本的代谢物，确定不同样本的差异化合物。
...【技术特征摘要】
1.一种烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将烟草根系土壤在提取剂中进行代谢物提取，静置后取上清液进行干燥得到干燥样品；2)在干燥样品中加入有机溶剂复溶，得到待检测样品；3)对待检测样品进行lc-ms检测，所述检测时使用的色谱柱为waters cortecs uplc c18色谱柱。
2.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，其特征在于，所述提取剂为甲醇氯仿混合溶剂，所述甲醇氯仿混合溶剂中的甲醇和氯仿的体积比为1:1～2。
3.如权利要求1或2所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，其特征在于，所述烟草根系土壤与提取剂的质量比为1:(4.5～5.5)。
4.如权利要求1或2所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，其特征在于，所述提取为在超声条件下提取25～35min。
5.如权利要求1所述的烟草根系土壤代谢物的lc-ms检测方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑庆霞，卢鹏，刘萍萍，翟妞，陈千思，张慧，徐国云，金立锋，王晨，李泽锋，周会娜，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。