【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶工程和生物，具体涉及一种pet水解酶突变体及其应用。
技术介绍
1、聚对苯二甲酸乙二醇酯（pet）是一种常见的塑料，由取自原油的对苯二甲酸（tpa）和乙二醇（eg）通过酯键相连构成。pet制品由于其可塑性以及稳定性高，目前已被广泛应用到食品、药品、化妆品包装等领域，其产生的废弃物数量巨大，是白色污染的主要来源之一。由于其稳定性高，pet废弃物在自然条件下需要数百年才能完全分解，导致在全球生态系统中累积并入侵人类食物链，严重威胁到生态系统和人类健康。
2、通过生物酶法对pet塑料进行回收是一种绿色理想的处理方法，为解决pet废弃污染提供了新契机。目前，已经鉴定出许多酯酶、脂肪酶或角质酶形式的pet水解酶，其中ispetase、lcc是研究最广泛的塑料降解酶，许多研究团队基于这两个野生型pet水解酶开发了稳定性更高的酶突变体，例如durapetase，hotpetase，fastpetase，depopetase，和lcciccg，但由于ispetase、lcc自身结构限制，他们的突变体降解pet的能力已经到达一个瓶颈，尚缺乏更多优秀的pet水解酶改造模板。并且目前所报道的pet水解酶都只含有一个pet水解结构域，缺乏底物结合结构域，这也是限制pet水解酶活性的重要因素。近期，本团队在micromonospora sp. hm5-17中发现了一种新型pet水解酶lspet4，除了pet水解结构域外还含有碳水化合物结构域（cbm），且与常见的pet水解酶相比，lspet4水解酶与底物结合构象为直线构象，这区
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于通过对pet水解酶lspet4结构研究，结合定向进化技术，提供一种pet水解酶突变体，该突变体具有更好的酶活，可提升pet水解酶的工业应用价值。
2、为实现上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种pet水解酶突变体，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
4、本专利技术的第二目的在于提供编码上述pet水解酶突变体的核苷酸序列，一个可选的方案如seq id no：2所示。
5、本专利技术的第三目的在于提供包含上述核苷酸序列的重组载体。优选的，选用pet-22b质粒构建所述重组载体。
6、本专利技术的第四目的在于提供包含上述重组载体的工程菌株。优选的，选用大肠杆菌作为宿主菌构建所述工程菌株。
7、本专利技术的第五目的在于提供上述pet水解酶突变体在水解pet中的应用。
8、作为一种优选的实施方式，所述应用包括：在pet的溶液中加入所述pet水解酶突变体，进行pet水解。
9、作为一种优选的实施方式，所述pet的溶液的溶剂为磷酸盐缓冲液和有机溶剂的混合液。优选的，所述有机溶剂为二甲基亚砜。
10、作为一种优选的实施方式，所述pet水解酶突变体在30℃-55℃范围内水解pet；优选45-55℃。
11、作为一种优选的实施方式，所述pet水解酶突变体在ph7.4-8.0环境下水解pet。
12、在对现有lspet4结构研究过程中，专利技术人认为现有lspet4蛋白的第96位、第127位、第130位、第241位这四个位点位于酶的催化口袋，因此对这四个位点氨基酸进行定向突变后，有利于底物与酶活性口袋的直线型结合，从而有利于提高lspet4的酶活性能；第209位、第238位点位于酶分子表面，对这两个氨基酸进行突变后有利于盐桥的形成，从而增加蛋白质的稳定性；基于上述六个点位，将lspet4突变酶，命名为lspet。实验结果表明突变酶增加了对pet的水解活性，使用突变酶进行降解pet反应，可以使降解pet反应的产量提升，具有良好的工业应用价值。
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1.一种PET水解酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.编码权利要求1所述PET水解酶突变体的核苷酸序列。
3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组载体。
4.包含权利要求3所述重组载体的工程菌株。
5.权利要求1所述PET水解酶突变体在水解PET中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：在PET的溶液中加入所述PET水解酶突变体，进行PET水解。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PET的溶液的溶剂为磷酸盐缓冲液和有机溶剂的混合液。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述有机溶剂为二甲基亚砜。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述PET水解酶突变体在30℃-55℃范围内水解PET；优选45-55℃。
10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述PET水解酶突变体在pH7.4-8.0环境下水解PET。
【技术特征摘要】
1.一种pet水解酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。
2.编码权利要求1所述pet水解酶突变体的核苷酸序列。
3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组载体。
4.包含权利要求3所述重组载体的工程菌株。
5.权利要求1所述pet水解酶突变体在水解pet中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：在pet的溶液中加入所述pet水解酶突变体，进行pe...
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