【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开提供用于合成寡聚化合物(包括作为反义剂或其部分的寡聚化合物)的稳定的试剂组合物，所述寡聚化合物包含具有至少一个修饰的核苷间连接基团的修饰的寡核苷酸。
技术介绍
1、反义技术背后的原理是，反义化合物与靶核酸杂交，并调节所述靶核酸的量、活性和/或功能。例如，在某些情况下，反义化合物导致靶标的转录或翻译改变。这种表达的调节可通过例如靶rna降解或基于占位的抑制来实现。通过降解调节rna靶功能的一个实例是靶rna在与dna样反义化合物杂交时基于rna酶h的降解。
2、通过靶降解调节基因表达的另一实例是rna干扰(rnai)。rnai是指通过利用rna诱导的沉默复合物(risc)的机制进行的反义介导的基因沉默。调节rna靶功能的另外的实例为通过基于占位的机制，如微小rna天然采用的机制。微小rna是调控蛋白质编码rna的表达的小的非编码rna。反义化合物与微小rna的结合阻止微小rna与其信使rna靶标的结合，因此干扰微小rna的功能。微小rna模拟物可增强天然微小rna功能。某些反义化合物改变前mrna的剪接。调节基因表达的另一实例是在crispr系统中使用反义化合物。无论具体机制如何，序列特异性都使得反义化合物值得被考虑作为用于靶标确认和基因功能化的工具以及作为选择性调节参与疾病的发病机制的基因的表达的治疗剂。
3、反义技术是用于调节一种或多种特定基因产物的表达的有效手段，因此可证明其在许多治疗、诊断和研究应用中具有独特的用途。可以将化学修饰的核苷结合到反义化合物中以增强一种或多种特性，如核酸酶抗性、耐受
4、按多步骤过程来化学合成包含寡核苷酸的寡聚化合物。取代的磺酰基叠氮化物是用于合成键修饰的寡核苷酸的有用试剂，但它们可能是高能量物质，并且特别是在生产规模上使用起来很危险。开发新的稳定试剂组合物和反应条件以大规模改善具有潜在危险性的化学物质仍然是一项重要挑战。
技术实现思路
1、本公开提供合成包含修饰的寡核苷酸的寡聚化合物(包括作为反义剂或其部分的寡聚化合物)的方法，所述修饰的寡核苷酸由通过核苷间连接基团连接的连接核苷组成，其中所述核苷间连接基团中的至少一者具有式i：
2、
3、其中x和r如本文所定义。所述方法可包括将稳定化物质添加到高能量试剂的组合物中。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种制备修饰的寡核苷酸的方法，包括使具有亚磷酸三酯核苷间键的第一寡核苷酸中间体与至少一种稳定剂和与包含磺酰基氧化剂的氧化溶液接触以形成具有式XIV的核苷间连接基团的第二寡核苷酸中间体：
2.如权利要求1所述的方法，其中R是甲基，且所述磺酰基氧化剂是甲磺酰基叠氮化物(MsN3)。
3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含所述至少一种稳定剂。
4.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液不包含所述至少一种稳定剂。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含选自乙腈、甲苯、二氯甲烷、吡啶、N-甲基-2-吡咯烷酮及其组合的溶剂。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂选自环丁砜和磷酸三苯酯(TPP)。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中至少一种稳定剂是环丁砜，任选其中环丁砜是唯一的稳定剂。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中至少一种稳定剂是TPP，任选其中TPP是唯一的稳定剂。
9.如权利要求1至
10.如权利要求9所述的方法，其中所述非交联聚合物是聚苯乙烯。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中通过从所述氧化溶液和所述至少一种稳定剂中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于500J.g-1的燃烧能。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中通过从所述氧化溶液和所述至少一种稳定剂中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于300J.g-1的燃烧能。
13.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为0.1至10当量的所述至少一种稳定剂。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为1至10当量的所述至少一种稳定剂。
15.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为3至6当量的所述至少一种稳定剂。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为4至5当量的所述至少一种稳定剂。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.1至10M的所述磺酰基氧化剂。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.5至5M的所述磺酰基氧化剂。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.6至1.5M的所述磺酰基氧化剂。
20.一种合成修饰的寡核苷酸的方法，所述修饰的寡核苷酸包含至少一个式I的核苷间键：
21.如权利要求20所述的方法，其中每个R是甲基。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述磺酰基氧化剂是甲磺酰基叠氮化物，且所述氧化溶液包含所述甲磺酰基叠氮化物和所述至少一种稳定剂。
23.如权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂是环丁砜，任选其中环丁砜是唯一的稳定剂。
24.如权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂是TPP，任选其中TPP是唯一的稳定剂。
25.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中通过从包含所述磺酰基氧化剂和所述至少一种稳定剂的溶液中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于500J.g-1的燃烧能。
26.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中通过从包含所述磺酰基氧化剂和所述至少一种稳定剂的溶液中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于300J.g-1的燃烧能。
27.如权利要求20至26中任一项所述的方法，其中每个X是O。
28.如权利要求20至27中任一项所述的方法，其中所述封端试剂是乙酸酐。
29.如权利要求20至28中任一项所述的方法，包括用氢氧化铵处理所述修饰的寡核苷酸以移除保护基团，并从所述固体支持物上切割所述修饰的寡核苷酸。
30.如权利要求20至29中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含12至25个连接核苷。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含硫代磷酸酯和甲磺酰氨基磷酸酯以及任选的磷酸二酯核苷间键。
32.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含选自磷酸二酯、硫代磷酸酯和甲磺酰氨基磷酸酯核苷间键的核苷间键，并且不包含其它核苷间键。
33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述修饰的寡核苷酸...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制备修饰的寡核苷酸的方法，包括使具有亚磷酸三酯核苷间键的第一寡核苷酸中间体与至少一种稳定剂和与包含磺酰基氧化剂的氧化溶液接触以形成具有式xiv的核苷间连接基团的第二寡核苷酸中间体：
2.如权利要求1所述的方法，其中r是甲基，且所述磺酰基氧化剂是甲磺酰基叠氮化物(msn3)。
3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含所述至少一种稳定剂。
4.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液不包含所述至少一种稳定剂。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含选自乙腈、甲苯、二氯甲烷、吡啶、n-甲基-2-吡咯烷酮及其组合的溶剂。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂选自环丁砜和磷酸三苯酯(tpp)。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中至少一种稳定剂是环丁砜，任选其中环丁砜是唯一的稳定剂。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中至少一种稳定剂是tpp，任选其中tpp是唯一的稳定剂。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中至少一种稳定剂是非交联聚合物。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述非交联聚合物是聚苯乙烯。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中通过从所述氧化溶液和所述至少一种稳定剂中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于500j.g-1的燃烧能。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中通过从所述氧化溶液和所述至少一种稳定剂中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于300j.g-1的燃烧能。
13.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为0.1至10当量的所述至少一种稳定剂。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为1至10当量的所述至少一种稳定剂。
15.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为3至6当量的所述至少一种稳定剂。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相对于所述磺酰基氧化剂为4至5当量的所述至少一种稳定剂。
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.1至10m的所述磺酰基氧化剂。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.5至5m的所述磺酰基氧化剂。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.6至1.5m的所述磺酰基氧化剂。
20.一种合成修饰的寡核苷酸的方法，所述修饰的寡核苷酸包含至少一个式i的核苷间键：
21.如权利要求20所述的方法，其中每个r是甲基。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述磺酰基氧化剂是甲磺酰基叠氮化物，且所述氧化溶液包含所述甲磺酰基叠氮化物和所述至少一种稳定剂。
23.如权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂是环丁砜，任选其中环丁砜是唯一的稳定剂。
24.如权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述至少一种稳定剂是tpp，任选其中tpp是唯一的稳定剂。
25.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中通过从包含所述磺酰基氧化剂和所述至少一种稳定剂的溶液中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于500j.g-1的燃烧能。
26.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中通过从包含所述磺酰基氧化剂和所述至少一种稳定剂的溶液中蒸发所述溶剂获得的残留物具有小于300j.g-1的燃烧能。
27.如权利要求20至26中任一项所述的方法，其中每个x是o。
28.如权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁·A·罗德里格斯，
申请(专利权)人：IONIS制药公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。