【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体而言，涉及人乳头病毒16型e7蛋白的制备及其应用。
技术介绍
1、目前，基于分子生物学手段的病毒dna检测是人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，hpv)感染的主要诊断方式，然而这种方法只能检测到组织中的现存感染，在组织取样困难或取样过程不规范的情况下难以进行。而既往研究已证实hpv的血清学指标可有效预测hpv感染的转归，其中hpv e7特异性抗体水平的变化特征更是与hpv相关癌症的发生发展及hpv疫苗免疫后的机体反应密切相关(frazer，2010；parker et al.,2018)。因而，更加准确和精细化地检测e7特异性抗体水平具有重要的临床转化意义。
2、hpv e7蛋白具有较强的抗原性，其在hpv相关肿瘤中持续表达并刺激机体产生多种类型的抗体，包括igm、igg和iga等。igg在体内广泛分布，是最主要的免疫球蛋白，病毒再次刺激时igg为主要抗体，具有亲和力高的特点，是全身性体液免疫最主要的效应分子之一，根据重链恒定区的结构可以分为4种亚类，即igg1、igg2、igg3和igg4。iga在血清中的含量仅次于igg，其可以保护黏膜组织免受微生物侵袭，并通过微生物菌群维持免疫稳定；igm主要存在于血液中，提示新近发生的感染(schroeder and cavacini,2010)。因而，全面检测e7特异性抗体各亚型的表达水平对hpv感染及其相关肿瘤的诊断及预后预测具有重要价值。目前e7血清特异性抗体的检测主要采用间接elisa法，首先将e7抗原蛋白结合到elisa
3、因为e7蛋白无法从哺乳动物的病变组织或重组细胞中分离获得，e7特异性抗体水平的检测主要依赖于e7蛋白的体外制备和纯化，其所得e7蛋白的表达量和纯度是决定检测准确性的关键因素之一。目前主要采用基因工程技术从大肠杆菌原核系统进行e7重组蛋白的表达，并通过添加相应蛋白纯化标签以提升所制备蛋白的纯度。e7重组蛋白现有常用的纯化标签存在一定的缺点，比如无法提高重组蛋白的可溶性，纯化纯度不高，影响重组蛋白的功能等问题。
4、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供人乳头病毒16型e7蛋白的制备及其应用。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术实施例提供了一种人乳头病毒16型e7蛋白的制备方法，其包括：对含有gst标签、人乳头病毒16型e7重组蛋白的核苷酸序列和his标签的表达载体进行诱导表达，获得表达产物；
4、对所述表达产物进行gst纯化、gst标签切除和镍柱纯化，以获得融合有his标签的人乳头病毒16型e7重组蛋白；
5、其中，所述镍柱纯化包括：平衡、洗杂和洗脱；所述洗杂采用的洗杂液包括10mm～80mm的咪唑，洗杂液的洗杂体积≥柱体积的100倍。
6、第二方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的人乳头病毒16型e7蛋白的制备方法在制备抗人乳头病毒16型e7蛋白的抗体的检测试剂盒中的应用。
7、第三方面，本专利技术实施例提供了一种抗人乳头病毒16型e7蛋白的抗体的检测方法，其包括：
8、采用前述实施例所述的人乳头病毒16型e7蛋白的制备方法进行人乳头病毒16型e7重组蛋白的制备；
9、将以所述人乳头病毒16型e7重组蛋白作为抗原，进行抗人乳头病毒16型e7蛋白的抗体的检测；
10、所述方法不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
11、第四方面，本专利技术实施例提供了一种生物材料，其包括：核酸分子、含所述核酸分子的载体、含所述载体的宿主细胞中的任意一种；所述核酸分子的核苷酸序列如seq idno:2所示。
12、本专利技术具有以下有益效果：
13、本专利技术联合gst标签和6×his标签作为纯化标签，提高了可溶性人乳头病毒16型e7蛋白的纯化效率，通过gst纯化和镍柱纯化的方法对目的蛋白进行提纯，采用远超于正常洗脱体积的低浓度咪唑进行洗杂，避免或减少了gst标签非特异性结合镍柱较强难以去除的问题，使其目的蛋白的纯度达到90％以上，为检测血浆中的抗hpv 16e7的抗体奠定了基础，节约了实验成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种人乳头病毒16型E7蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：对含有GST标签、人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列和His标签的表达载体进行诱导表达，获得表达产物；
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗杂采用的洗杂液包括洗杂液1和洗杂液2，所述洗杂液1包括10mM～50mM的咪唑，所述洗杂液1的洗杂体积≥柱体积的100倍，所述洗杂液2包括30～80mM的咪唑，所述洗杂液2的洗杂体积≥柱体积的100倍；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗杂液2包括40～60mM的咪唑；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液包括200～300mM的咪唑。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述人乳头病毒16型E7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
6.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，在所述含有GST标签、人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列和His标签的表达载体中，所述人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列位于GST标签和His标
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括所述表达载体的制备：
8.如权利要求1～7任一项所述的人乳头病毒16型E7蛋白的制备方法在制备抗人乳头病毒16型E7蛋白的抗体的检测试剂盒中的应用。
9.一种抗人乳头病毒16型E7蛋白的抗体的检测方法，其特征在于，其包括：
10.一种生物材料，其特征在于，其包括：核酸分子、含所述核酸分子的载体、含所述载体的宿主细胞中的任意一种；所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
...【技术特征摘要】
1.一种人乳头病毒16型e7蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：对含有gst标签、人乳头病毒16型e7重组蛋白的核苷酸序列和his标签的表达载体进行诱导表达，获得表达产物；
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗杂采用的洗杂液包括洗杂液1和洗杂液2，所述洗杂液1包括10mm～50mm的咪唑，所述洗杂液1的洗杂体积≥柱体积的100倍，所述洗杂液2包括30～80mm的咪唑，所述洗杂液2的洗杂体积≥柱体积的100倍；
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗杂液2包括40～60mm的咪唑；
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述洗脱液包括200～300mm的咪唑。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述人乳头病毒16型e7蛋白的氨基酸序列如seq i...
【专利技术属性】
技术研发人员：任建君，赵宇，江传欢，宋瑶，邱轲，吴思思，彭星辰，毛敏姿，冯兰，饶郁芳，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。