【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种喹诺酮类药物检测方法，尤其是涉及一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法。
技术介绍
1、喹诺酮类(qμinoiones，qns)药物是一类高效谱广的抗生素，因其抗菌谱广、杀菌力强、不易与其他抗菌药物发生交叉耐药、价格便宜、使用方便等优势，被广泛应用于人体治疗、畜牧养殖和水产养殖等领域中。喹诺酮类抗生素药物在动物源食品中的过量或不规范使用可能会导致使用者产生过敏、恶心、呕吐、腹痛等不良反应，甚至造成中枢神经系统功能障碍；因代谢不完全而在水产品体内蓄积，导致致病菌耐药性增强，引起水体污染，破坏生态环境，严重威胁人类健康安全。基于安全考虑，我国禁止在食用动物中使用培氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星和氧氟沙星4类氟喹诺酮类抗生素。《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(gb31650—2019)规定鱼中环丙沙星和恩诺沙星的最大残留限量标准为100μg/kg。尽管国家和组织对喹诺酮类抗生素的使用标准有明确的规定，但是水产品中上述抗生素的超标现象还是时有发生。因此，加强水产品中多种氟喹诺酮类药物残留含量的检测，对保证水产食品质量安全和生态环境质量具有积极意义。
2、目前qns的检测方法主要有高效液相-串联质谱法(hplc-ms/ms)、酶联免疫法(elisa)、微生物法、高效毛细管电泳分析法等。hplc-ms/ms法灵敏度高、检测限低、测定种类多，但该方法所需仪器设备昂贵、人员检测技术要求高，难以全面推广应用；酶联免疫法适用于大量样品的快速筛选，但结果不够准确，不适合作残
3、为了加强水产品中喹诺酮类药物残留监测的同时降低检测过程中对环境和检测人员职业健康产生的不良危害，迫切需要建立一种操作简便、高效、准确、有机试剂使用量减少的新型绿色检测分析方法。
技术实现思路
1、本专利技术的专利技术目的是为了提供一种成本低廉、操作简单、灵敏度高且环境友好的基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，包括以下步骤：
3、(1)提取
4、将水产品样品均质混匀后，称取样品3.0g，加入mcllvaine-na2edta提取液5ml，涡旋，超声振荡，离心，取上清液，沉淀物按上述步骤重复提取，合并上清液10～15ml备用。
5、(2)分散液液微萃取
6、取100～300μl低共熔溶剂作为萃取剂，注入到上清液中，涡旋分散，离心，取上层萃取剂100μl，并加入100μl甲醇进行稀释，有机膜过滤后，将滤液作为上机溶液，使用高效液相色谱仪进样检测，得高效液相色谱色谱图，确认五种喹诺酮类药物并得到对应的色谱峰面积，所述五种喹诺酮类药物为培氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星和洛美沙星。本专利技术中采用低共熔溶剂作为萃取剂，对水产品中喹诺酮类药物进行萃取富集，具有操作简单、溶剂用量少、萃取时间短和萃取效率高等特点。
7、(3)检测
8、制备系列浓度的五种喹诺酮类药物的混合标准溶液，采用高效液相色谱仪分析，以五种喹诺酮类药物的混合标准溶液的质量浓度为横坐标x，相应的色谱峰面积为纵坐标y，绘制标准工作曲线，得到五种喹诺酮类药物的线性方程，将步骤(2)中确认的喹诺酮类药物的色谱峰面积与标准工作曲线对照，计算得到喹诺酮类药物的浓度。
9、作为优选，步骤(1)中，所述mcllvaine-na2edta提取液通过以下方法制得：取柠檬酸12.6g、磷酸氢二钠27.6g、乙二胺四乙酸二钠3.72g，加水800ml使溶解，调整ph值至4.0，再用水稀释至1000ml，得mcllvaine-na2edta提取液。mcllvaine-na2edta提取液的ph值，会影响水产品中喹诺酮类药物的回收率，专利技术人经试验发现，以百里酚-癸酸(摩尔比2：1)作为萃取剂，mcllvaine-na2edta提取液的ph值为4.0时，目标回收率高，因此本专利技术选择mcllvaine-na2edta提取液的ph值为4.0的提取条件。
10、作为优选，步骤(2)中，所述低共熔溶剂通过以下方法制得：将氢键供体和氢键受体置于反应容器中，加热搅拌反应，反应后得澄清透明溶液即低共熔溶剂。
11、作为优选，所述氢键受体为百里酚，所述氢键供体为癸酸，氢键受体与氢键供体的摩尔比为2：1。不同氢键受体和不同氢键供体以不同摩尔比制得的低共熔溶剂，其萃取效果各不相同，专利技术人经试验发现，氢键受体选择百里酚，氢键供体选择癸酸，氢键受体与氢键供体的摩尔比为2：1，制得的低共熔溶剂(mcllvaine-na2edta提取液ph值为4.0)对五种喹诺酮类药物具有较好的萃取效果。
12、作为优选，加热至35～100℃搅拌5～30min。
13、作为优选，步骤(3)中，高效液相色谱仪检测条件为：c18液相色谱柱，其规格为250mm×4.6mm，粒径为5μm，色谱柱温度为25～40℃；进样体积为10μl，检测波长：激发波长290nm，发射波长450nm；流动相a为1％乙酸水溶液，流动相b为甲醇，流速为1.0mlmin-1；梯度洗脱程序如下：0～2min，18％(b)；2～5min，18％～19％(b)；2～5min，18％～19％(b)；5～10min，19％(b)；10～10.5min，19％～20％(b)；10.5～11min，20％～21％(b)；11～18min，21％(b)；18～19min，21％～90％(b)；19～24min，90％(b)；24～25min，90％～18％(b)；c18液相色谱柱柱在两次运行之间平衡至初始条件5分钟。
14、因此，本专利技术具有如下有益效果：以ph值4.0的mcllvaine-na2edta提取液作为提取液，以百里酚和癸酸合成新型绿色环保的疏水性共熔溶剂作为液液微萃取技术的萃取剂，并结合高效液相色谱技术对水产品中喹诺酮类药物残留进行萃取、富集、分离与检测，具有富集倍数高、检测限低、重现性好、成本低、毒性低等优点。
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1.一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述Mcllvaine-Na2EDTA提取液通过以下方法制得：取柠檬酸12.6 g、磷酸氢二钠27.6 g、乙二胺四乙酸二钠3.72 g，加水800 mL使溶解，调整pH值至4.0，再用水稀释至1000 mL，得Mcllvaine-Na2EDTA提取液。
3.根据权利要求1所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述低共熔溶剂通过以下方法制得：将氢键供体和氢键受体置于反应容器中，加热搅拌反应，反应后得澄清透明溶液即低共熔溶剂。
4.根据权利要求3所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，所述氢键受体为百里酚，所述氢键供体为癸酸，氢键受体与氢键供体的摩尔比为2：1。
<...【技术特征摘要】
1.一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述mcllvaine-na2edta提取液通过以下方法制得：取柠檬酸12.6 g、磷酸氢二钠27.6 g、乙二胺四乙酸二钠3.72 g，加水800 ml使溶解，调整ph值至4.0，再用水稀释至1000 ml，得mcllvaine-na2edta提取液。
3.根据权利要求1所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述低共熔溶剂通过以下方法制得：将氢键供体和氢键受体置于反应容器中，加热搅拌反应，反应后得澄清透明溶液即低共熔溶剂。
4.根据权利要求3所述的一种基于疏水性低共熔溶剂利用高效液相色谱法同时检测水产品中五种喹诺酮类药物的方法，其特征在于，所述氢键受体为百里酚，所述氢键供体为癸酸，氢键受体与氢键供体的摩尔比为2：1。
5.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：何鹏飞，张子昂，梅光明，张小军，李佩佩，陈思，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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