【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的sirna及其应用。
技术介绍
1、长期以生长速度为重点的肉鸡育种方式，导致肉鸡生产中存在肉品质明显下降的问题。如何提高鸡肉品质已经成为当今肉鸡育种工作者面临的重要理论和实践问题。
2、由不同类型肌纤维组成的骨骼肌是动物体内最大的糖代谢组织。位于线粒体基质中的丙酮酸脱氢酶激酶1（pyruvate dehydrogenase kinase 1, pdk1）是细胞糖酵解中关键限制酶。在糖代谢过程中，pdk1通过磷酸化丙酮酸脱氢酶（pdh），从而阻断丙酮酸转化成乙酰辅酶a进入线粒体参加三羧酸循环，在调节细胞氧化和酵解代谢转换以及线粒体的三磷酸腺苷（atp）合成中发挥核心作用。在低氧诱导条件下，大鼠骨骼肌pdk1表达的提高，导致富含糖酵解型myhc πb蛋白的纤维增加；在c2c12肌管中过表达 pdk1，不仅促进糖酵解型myhc πb的增加，还促进myhc πa和 myhc πx蛋白的增加；pdk1可能在肌肉代谢和肌纤维类型组成中发挥纽带作用，从而导致肌肉功能特性的改变。
3、在鸡上，本课题组在前期研究中发现，鸡骨骼肌中pdk1蛋白的表达与肌肉的肌纤维类型组成密切相关，快白肌纤维占比越高的肌肉中pdk1表达越高。但目前对鸡pdk1的功能还不是很清楚。在鸡肌肉组织和成肌细胞中，pdk1蛋白表达主要定位于细胞质，因此，借助转录后水平调控靶基因表达的sirna开展鸡pdk1基因功能研究显得十分迫切。
技术实现思路>
1、针对目前对鸡pdk1的功能还不是很清楚的问题，本专利技术提供了一种抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的sirna及其应用，该sirna能够通过特异性敲降鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1的表达来鉴定基因功能，揭示鸡骨骼肌生长发育和肌纤维类型形成的调控机制。
2、为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的sirna，所述sirna的正义链的序列为5’-gacagacuauucaacuaua-3’（seq no.1），反义链的序列为5’-uauaguugaauagucuguc-3’（seq no.2）。
3、进一步地，所述正义链和所述反义链的3’端还添加有两个垂悬碱基dt。
4、本专利技术第二方面提供一种上述的sirna在制备抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的试剂盒中的应用。
5、所述试剂盒还包括用于检测鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的引物组。
6、本专利技术第三方面提供一种上述的抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1的sirna的核苷酸序列的重组表达载体、转基因细胞系或重组病毒。
7、本专利技术第四方面提供一种上述的sirna、上述的重组表达载体、转基因细胞系或重组菌在鉴定鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1功能中的应用。
8、通过上述技术方案，本专利技术实现了以下有益效果：
9、本专利技术相对于现有技术而言，提供了一种能够靶向丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1的sirna，将其转入鸡成肌细胞后可以有效降低丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1的表达，抑制效率接近50%，可见其敲降效率很高。本专利技术的sirna通过特异性敲降鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1的表达来鉴定基因功能，揭示鸡骨骼肌生长发育和肌纤维类型形成的调控机制，不仅对提升我国家禽产品的市场竞争力具有重要意义，而且对于揭示人类骨骼肌代谢功能异常引起的肌肉相关疾病的分子机理也具有很好的借鉴价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因PDK1表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正义链的序列为5’-GACAGACUAUUCAACUAUA-3’（SEQ NO.1），反义链的序列为5’-UAUAGUUGAAUAGUCUGUC-3’（SEQ NO.2）。
2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述正义链和所述反义链的3’端还添加有两个垂悬碱基dT。
3.权利要求1或2所述的siRNA在制备抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因PDK1表达的试剂盒中的应用。
4.含有编码权利要求1或2所述的抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因PDK1的siRNA的核苷酸序列的重组表达载体、转基因细胞系或重组病毒。
5.权利要求1或2所述的siRNA、权利要求4所述的重组表达载体、转基因细胞系或重组菌在鉴定鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因PDK1功能中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种抑制鸡丙酮酸脱氢酶激酶1基因pdk1表达的sirna，其特征在于，所述sirna的正义链的序列为5’-gacagacuauucaacuaua-3’（seq no.1），反义链的序列为5’-uauaguugaauagucuguc-3’（seq no.2）。
2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，所述正义链和所述反义链的3’端还添加有两个垂悬碱基dt。
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【专利技术属性】
技术研发人员：单艳菊，束婧婷，姬改革，章明，巨晓军，刘一帆，屠云洁，盛中伟，邹剑敏，赵伟东，郑国庆，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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