【技术实现步骤摘要】
本申请涉及微生物及微生物发酵领域，具体而言，涉及北苍术发酵菌种及筛选方法。
技术介绍
1、北苍术自古以来就是我国的一种珍贵中药材，有着复杂的化学成分和显著的药理活性，具有调节肠道菌群，抗肿瘤，抑菌等多种药理作用。由于过度采摘和市场需求量不断攀升，只是其产量不能满足市场需求。其中多糖作为北苍术的主要活性成分，研究表明具有保肝作用、抗氧化作用及免疫增强作用，临床应用越来越得到人们的关注。因此目前关于北苍术应用主要是通过简单的炮制和制剂工艺，这种方法成本高、操作复杂且使其主要成分难以得到充分的利用，因而无法适应工业化生产的需求，因此必须寻求高效且简便的利用北苍术的方法。
2、随着现代生物技术的日益发展，将发酵工程等现代工艺与传统中药发酵结合起来，通过利用微生物发酵产生的酶与中药中复杂的化学成分发生反应，从而得到与提高其有效成分含量。中药微生态发酵在增强药物疗效、减轻毒副作用、节约药材资源等方面均较传统发酵方法存在显著优势，具有广阔的研究与应用前景。
3、北苍术中含有淀粉、纤维素等物质，容易被微生物利用，可发酵制取饲料和有机肥料。利用微生物固态发酵北苍术，可以进一步促进北苍术有效成分溶出，是很好的中药再利用途径。
4、申请内容
5、在一方面，本申请公开了北苍术发酵用菌种的筛选方法包括以下步骤：
6、将酒曲菌种接种于mrs培养基进行活化培养，将活化培养的菌种接种于液体培养基中静置培养，得到菌种种子液；
7、将北苍术粉末过40-60目筛后烘干，加水制成北苍术固体培养基并
8、称取恒温发酵培养的样品，与无菌生理盐水混合，并匀浆处理制成样品匀液；
9、稀释样品匀液，吸取样品匀液的稀释液涂布于mrs平板培养基，恒温培养；得到初筛菌种；
10、将初筛菌种接种于北苍术固体培养基，进行恒温培养，然后烘干，测定培养基中多糖得率，选取粗多糖得率最高的样品对应的菌株为北苍术发酵备用菌种。
11、其中北苍术固体培养基是将北苍术粉末加水作为培养基底物制备得到。mrs液体培养基为常规的液体培养基。
12、在一些实施方案中，北苍术的烘干温度为58-63℃；北苍术固体培养基的含水量为47％-52％；
13、基础培养基为mrs培养基。
14、实施例中，北苍术固体培养基的示例性的配方如下所述：北苍术50g，纯净水50g，121℃灭菌20min；mrs培养基为：蛋白胨10g，牛肉膏8g，酵母浸粉4g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.04g，吐温80 1g，琼脂粉20g，加入1l纯净水，溶解后调节ph至5.7±0.2，121℃灭菌20min。
15、在一些实施方案中，菌种种子液的接种量为5.8％-6.4％(v/w)。
16、在一些实施方案中，恒温发酵培养的时间为68-75h。
17、在实施例中，控制菌株的接种量，有利于快速进行发酵，方便对菌种进行筛选。控制恒温发酵培养的时间为68-75h，既能保证底物的成分发酵和分解，也能避免生长过剩，导致菌种的死亡；确保菌种的活力的同时，保证发酵产物的产量最大化。
18、在一些实施方案中，匀浆处理包括进行130-160r/min摇床匀浆26-32min，制成1:9-12的样品匀液。
19、在实施例中，通过初筛复苏菌种，通过初步地培养后，再次将已经复苏在培养基中的菌种。连同培养基和菌种一起称取一定量的样品，通过加入无菌生理盐水，然后在摇床上进行匀浆处理，得到样品匀液。
20、将吸取定量的样品匀液进行4-8个梯度的梯度稀释，然后选取倒数三个梯度的稀释液，涂布于mrs平板培养基上；在37℃的条件下进行恒温培养。
21、每个菌株进行三次平行实验并取平均值；计算培养的菌落数，作为衡量菌株在北苍术中的生长能力的筛选指标。
22、
23、式中：n为同一稀释度3组平行的平均菌落数，cfu/ml；n为稀释倍数；m为发酵北苍术粉干基重量，g。
24、在一些实施方案中，初筛菌种的接种量为5.8％-6.4％(v/w)，恒温培养时间为45-50h。
25、将初筛的菌株，再次接种到新的北苍术固体培养基中，并设置对照组，对照组不接种菌株；再次进行恒温培养，然后测定培养基中的多糖的含量，以粗多糖含量最高的培养基中对应的菌种为发酵备用菌种。
26、粗多糖的测定办法包括，恒温发酵结束后，取出培养基，烘干后研磨成粉末。
27、取一定量的样品，加入95％的乙醇，静置，然后超声处理；离心后弃上清液，重复一次后；挥发干乙醇后，得到脱脂样品。
28、取脱脂样品按一定的料液比加入蒸馏水，超声提取，然后沸水浴提取；热过滤后李欣处理后，得到粗多糖提取液。
29、旋蒸浓缩后至一定量，加入3-6倍体积的95％乙醇混合；4℃静置，然后离心弃去上清液，沉淀依次用无水乙醇、丙酮清洗三次；干燥沉淀至恒重，即得粗多糖。
30、然后用蒽酮-硫酸法测定粗多糖的得率；测定发酵前后的粗多糖得率，以粗多糖含量最高的培养基中对应的菌种为发酵备用菌种。
31、另外一方面，本申请公开了发酵菌种，其通过前述北苍术发酵用菌种的筛选方法筛选获得，包括g1菌种，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc28434，保藏日期为2023年9月12日，分类命名为乳酸片球菌、拉丁文名称为pediococcusacidilactici，该菌种保藏检测存活。
32、另外一方面，本申请公开了北苍术发酵用菌剂，选自以下菌种组成的组，其通过前述北苍术发酵用菌种的筛选方法筛选获得，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc 28434，保藏日期为2023年9月12日，分类命名为乳酸片球菌、拉丁文名称为pediococcus acidilactici，该菌剂保藏检测存活。
33、另外一方面，本申请公开了前述发酵菌种或前述的北苍术发酵用菌剂在发酵中的应用。
34、本申请的有益效果包括：申请人通过创造性的劳动，设计北苍术发酵用菌种筛选实验方案，能方便快捷高效的筛选出符合预期的菌种；该菌株活力强，代谢旺盛；能提高发酵产物的得率；且发酵操作简单，缩短发酵周期，降低成本。
技术实现思路
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1.北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，北苍术的烘干温度为58-63℃；所述北苍术固体培养基的含水量为47％-52％；
3.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述菌种种子液的接种量为5.8％-6.4％(v/w)。
4.根据权利要求3所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述恒温发酵培养的时间为68-75h。
5.根据权利要求4所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述匀浆处理包括进行130-160r/min摇床匀浆26-32min，制成1:9-12的所述样品匀液。
6.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，稀释所述样品匀液采用梯度稀释，稀释倍数为8-12倍；恒温培养的时间为45-50h。
7.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述初筛菌种的接种量为5.8％-6.4％(v/w)，恒温培养时间为65-75h。
8.一种
9.北苍术发酵用菌剂，其特征在于，所述北苍术发酵用菌剂选自以下菌种组成的组，其通过权利要求1-7任一项所述北苍术发酵用菌种的筛选方法筛选获得，包括G1菌种，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 28434。
10.如权利要求8所述的发酵菌种或权利要求9所述的北苍术发酵用菌剂在发酵中的应用。
...【技术特征摘要】
1.北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，北苍术的烘干温度为58-63℃；所述北苍术固体培养基的含水量为47％-52％；
3.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述菌种种子液的接种量为5.8％-6.4％(v/w)。
4.根据权利要求3所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述恒温发酵培养的时间为68-75h。
5.根据权利要求4所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，所述匀浆处理包括进行130-160r/min摇床匀浆26-32min，制成1:9-12的所述样品匀液。
6.根据权利要求1所述的北苍术发酵用菌种的筛选方法，其特征在于，稀释所述样品匀液采用梯...
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