【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程，具体涉及功能基因pbcob.a.1及其应用。本专利技术从‘砀山酥梨’克隆得到pbcob.a.1基因，利用体外原核表达蛋白处理花粉和磁转染技术证明pbcob.a.1具有促进果树花粉管生长的功能。
技术介绍
1、自交不亲和反应过程(si)是雌蕊和花粉s基因产物相互作用的一个过程(xue y betal.，1995)。基于不同的机制，自交不亲和性(si)被分为孢子体ssi主要存在于十字花科中，和配子体si(gsi)主要在蔷薇科、茄科和车前花科中被广泛研究。
2、其中，gsi由一个包含雌蕊s-rnase和花粉决定因子f-box(slf/sfb)的s位点复等位基因控制(meng d et al.，2014)。雌蕊s-rnase能够识别自我的花粉，降解花粉rna，从而阻止自我花粉管的生长，但对非我的花粉管没有抑制作用(kao t h et al.，2004)。雌蕊和花粉s基因功能正常时表现出自交不亲和性,而当雌蕊或花粉s基因异常时，有可能会导致自交亲和性突变。同时s-位点以外的修饰因子也参与自交不亲和反应，‘新雪’梨是自交亲和品种，经正反交试验发现后代遗传分析分离率不符合孟德尔理论比例，表明自交不亲和性的破坏可能是由位于s-位点外的修饰因子引起的(su-li shi et al.，2018)。
3、双受精指的是雄配子(精子)与雌配子(卵细胞)融合为一个合子,其中花粉管通过花柱将精子细胞输送到子房是双受精成功的关键所在。梨是深受百姓喜爱的水果之一，成功授粉受精是保证梨产量的基础。因此，开展关
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供具有促进蔷薇科果树花粉管生长的功能基因pbcob.a.1及其应用。
2、为了达到上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供蛋白pbcob.a.1或与蛋白pbcob.a.1相关的生物材料在促进蔷薇科果树花粉管生长或提高蔷薇科果树花粉授粉效率中的应用；本专利技术从‘砀山酥梨’克隆得到pbcob.a.1基因，该基因编码的蛋白pbcob.a.1，所述蛋白pbcob.a.1的氨基酸序列如seq idno.1所示。
4、进一步的，所述与蛋白pbcob.a.1相关的生物材料为以下(1)～(8)中的至少一种：
5、(1)编码所述蛋白pbcob.a.1的基因；
6、(2)含有(1)所述基因的表达盒；
7、(3)含有(1)所述基因的重组载体；
8、(4)含有(2)所述表达盒的重组载体；
9、(5)含有(1)所述基因的重组微生物；
10、(6)含有(2)所述表达盒的重组微生物；
11、(7)含有(3)所述重组载体的重组微生物；
12、(8)含有(4)所述重组载体的重组微生物。
13、进一步的，(1)中所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示，包含2025bp的开放阅读窗。
14、本专利技术利用基因克隆技术从梨中克隆得到pbcob.a.1核苷酸序列的引物，其碱基序列如下所示：
15、pbcob.a.1-f:5’-atgatggaaactagtaatatggtcatga-3’即seq id no.3
16、pbcob.a.1-r:5’-gtggaagcgatttgtcatgaaa-3’即seq id no.4
17、上述的应用，采用体外表达的重组蛋白pbcob.a.1处理蔷薇科果树的花粉促进花粉管生长；或者采用磁转染技术，在蔷薇科果树的花粉中超表达所述蛋白pbcob.a.1的编码基因促进花粉管生长。
18、本专利技术的具体实施方式中，所述的蔷薇科果树为梨。
19、一种提高花粉授粉效率的方法，该方法为以下(a)或(b)：
20、(a)采用体外表达的重组蛋白pbcob.a.1处理花粉促进花粉管生长，所述蛋白pbcob.a.1的氨基酸序列如seq id no.1所示；
21、(b)采用磁转染技术，在花粉中超表达所述蛋白pbcob.a.1的编码基因促进花粉管生长，所述蛋白pbcob.a.1的编码基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
22、一种提高花粉授粉效率的授粉试剂，该授粉试剂中包含蛋白pbcob.a.1，所述蛋白pbcob.a.1的氨基酸序列如seq id no.1所示。
23、本专利技术所述的室温为25±15℃。
24、本专利技术的有益效果：
25、本专利技术用重组蛋白培养花粉处理花粉管，结果证明所述蛋白pbcob.a.1能促进花粉管的生长，从而拓宽了梨中非s因子参与自交不亲和反应的调控机制。同时采用磁转染技术研究梨花粉管伸长的机制，可以很大程度上降低劳动力成本，为梨的育种工作提供理论依据。
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1.蛋白PbCOB.A.1或与蛋白PbCOB.A.1相关的生物材料在促进蔷薇科果树花粉管生长或提高蔷薇科果树花粉授粉效率中的应用；所述蛋白PbCOB.A.1的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，与蛋白PbCOB.A.1相关的生物材料为以下(1)～(8)中的至少一种：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，(1)中所述基因的核苷酸序列如SEQ ID
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，采用体外表达的重组蛋白PbCOB.A.1处理蔷薇科果树的花粉促进花粉管生长；或者采用磁转染技术，在蔷薇科果树的花粉中超表达所述蛋白PbCOB.A.1的编码基因促进花粉管生长。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的蔷薇科果树为梨。
6.一种提高花粉授粉效率的方法，其特征在于，该方法为以下(a)或(b)：
7.一种提高花粉授粉效率的授粉试剂，其特征在于，该授粉试剂中包含蛋白PbCOB.A.1，所述蛋白PbCOB.A.1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
【技术特征摘要】
1.蛋白pbcob.a.1或与蛋白pbcob.a.1相关的生物材料在促进蔷薇科果树花粉管生长或提高蔷薇科果树花粉授粉效率中的应用；所述蛋白pbcob.a.1的氨基酸序列如seq idno.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，与蛋白pbcob.a.1相关的生物材料为以下(1)～(8)中的至少一种：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，(1)中所述基因的核苷酸序列如seq id
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，采用体外表达的重...
【专利技术属性】
技术研发人员：张绍铃，徐颖，吴磊，谷超，睢志恒，齐开杰，谢智华，王亚茹，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：
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