【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及胶质瘤分子分型及预后评估的试剂盒及其应用。
技术介绍
1、中枢神经系统胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤，占恶性脑肿瘤的81％，当前who指南(2021版)根据病理学特征将胶质瘤分为i～iv级，根据病理学特征进行分级，i级胶质瘤是毛细胞星形细胞瘤，是一种生长缓慢、边界较清晰的囊性星形肿瘤，是一种良性胶质瘤病理分型。而对于细胞中不存在核异型性、无有丝分裂、无坏死的胶质瘤被定义为ii级胶质瘤。iii级胶质瘤为间变性的星形细胞瘤，iv级胶质瘤为多形性胶质母细胞瘤。iii级、iv级的胶质细胞瘤发病快速，为恶性程度最高的肿瘤，由于此类肿瘤可弥漫浸润，在经手术后，无法完全切除干净，因此术后需配合放疗与化疗。
2、ii级胶质瘤患者具有浸润性强，异质性高的特点，并且具有很高的复发及进展风险，五年内的复发率达到30％以上，长期的复发率高达80～90％。ii级胶质瘤患者群体内的个体生存差异很大，根据tcga以及中国胶质瘤数据库cgga患者统计，在所有具有完整生存期的ii级胶质瘤患者中，23.8％的患者在两年内死亡，而34.9％的患者生存期大于五年。组织病理学诊断下，ii级胶质瘤患者误诊率达43％，并使用不当的治疗的情形下，其中9％造成严重后果。
3、已经证明胶质瘤患者的生存风险与年龄升高、以及切除程度显著相关。此外，胶质瘤恶性程度还与分子突变情况相关，异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase，idh)是三羧酸循环中的一种关键性限速酶，催化异柠檬酸(isocitrate)氧化脱羧
4、根据nccn指南，除年龄小于40岁以及全切除的ii级胶质瘤患者无需化疗，其他患者目前尚缺乏具体的化疗指导方案。当前化疗一方面考虑到化疗毒性可能对人体造成较大损伤，如pcv联合化疗由于其毒性已经被禁止；另一方面，化疗带来的dna损伤可能造成肿瘤进展或耐药。因此，已经有许多研究对ii级胶质瘤患者化疗疗效进行研究。
5、胶质瘤预后与分子突变情况紧密相关，因此ii级胶质瘤患者在术后辅助化疗，是否可以使患者受益，需要根据胶质瘤分子状态进行深入探究。
6、其中idh是胶质瘤的驱动基因，idh突变患者的预后与野生型患者具有最显著的差异。但不同idh状态的患者应该如何治疗尚未定论。idh基因家族中的idh1和idh2是脑胶质瘤分子分型的重要分子指标，也被列入nccn指南以及中国脑胶质瘤指南中。另外，mgmt(o6-甲基鸟嘌呤-dna-甲基转移酶，o6-methylguanine-dna methyltransferase)启动子突变已经被确定是胶质瘤的化疗敏感性预测因素(n engl j med.2005；352(10):997-1003.published 2005,mar 10.)。当前胶质瘤化疗药物主要为烷化剂-替莫唑胺。
7、烷化剂化疗的原理是通过分子中的活性烷基产生烷化反应，导致细胞的dna发生变异，激活细胞凋亡程序，导致细胞死亡，胶质瘤治疗中常见的烷化剂有替莫唑胺，洛莫司汀，丙卡巴肼等。其中替莫唑胺是胶质瘤中最常用的烷化剂化疗药物，可以导致dna分子上鸟嘌呤第6位氧原子上的烷基化以及第7位氮原子的烷基化。通过甲基化加成物的错配修复，发挥细胞毒作用。mgmt是dna修复酶，位于人10号染色体长臂。mgmt蛋白通过修复烷化剂造成的dna损伤使细胞获得化疗抗性，它的基本功能是通过将鸟嘌呤o6位点的甲基转移至半胱氨酸残基来修复受损的鸟嘌呤核苷酸，从而避免了替莫唑胺等烷基化剂引起的基因突变，细胞死亡和肿瘤发生。因此mgmt基因是造成基因化疗抗性的一种因子。mgmt启动子(mgmt-p)的甲基化会导致mgmt蛋白的不可逆缺失，无法修复化疗所造成的损伤，提高了患者对烷化剂治疗的敏感性。
8、已有充分的研究证明了胶质母细胞瘤(gbm,who iv级)中mgmt-p甲基化的患者能从烷化剂治疗(如替莫唑胺)中获得更多生存收益，因此已经被纳入指南作为四级胶质瘤的用药指导标志物。然而mgmt-p在ii级胶质瘤患者中对化疗的指导作用尚未明确。
9、基于当前的胶质瘤分型和治疗指南，对于ii级高风险胶质瘤患者术后是否应该进行化疗尚未定论，且不同分子分型的肿瘤对化疗的敏感性不同，当前缺乏对于不同分子分型胶质瘤的特定治疗方案。
10、已有的部分化疗疗效临床研究中，忽视了分子变异对肿瘤恶性程度的影响。相关的临床实验rtog98-02认为联合放化疗相比单独放疗，可以提高低级别胶质瘤患者的总生存期(os)，jennifer等人的研究认为替莫唑胺(tmz)化疗可能对治疗低级别胶质瘤有积极作用，但这些研究都未考虑不同分子状态对疗效的影响。
11、rtog 0424临床实验结果认为，mgmt启动子甲基化可能是接受放化疗的高风险ii/iii级胶质瘤患者的良好预后生物标志物，但未考虑mgmt未甲基化的患者接受了过度治疗导致生存期缩短的可能性。
12、因此，本研究旨在发现ii级胶质瘤患者新的分子分型，以及分子分型用于预后评估，及指导对ii级胶质瘤患者采用不同治疗方案的用途。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种针对whoii级胶质瘤患者的分子分型方案以及用于预后评估和选择相应的治疗方案的用途，提供明确的风险分层和诊疗指导，可以有效预测/评估接受化疗对不同分子分型的ii级胶质瘤患者预后的影响。前述化疗包含术后辅助化疗。本专利技术的i～iv级胶质瘤分级是who指南根据病理学特征将胶质瘤进行的分级。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种ii级胶质瘤患者对化疗适用性预测的试剂盒：所述的试剂盒包含检测idh基因型的试剂，
4、以及包含检测mgmt-p甲基化的试剂。
5、所述的检测idh基因型的试剂是检测idh1和idh2基因型为突变型或野生型，只要其中之一为突变型即为突变型，若两个基因都为野生型则为野生型；所述的检测mgmt-p甲基化的试剂是检测mgmt启动子是甲基化还是未甲基化。
6、通过检测idh基因型(突变型和野生型)以及检测mgmt-p甲基化(甲基化和未甲基化)，可以将ii级胶质瘤本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种对II级胶质瘤患者分型的标志组合物，标志组合物包括：IDH的突变型标志物和MGMT-p的甲基化标志物。
2.如权利要求1所述的标志组合物，其中IDH的突变型标志物包括IDH1和/或IDH2的突变型标志物。
3.一种包含权利要求1所述的标志组合物在制备用于II级胶质瘤预后评估试剂盒中的用途。
4.如权利要求2所述的用途，其特征在于IDH突变型标志物，包括IDH1和IDH2中的至少一种。
5.如权利要求3或4所述用途，当IDH基因型为野生型且MGMT-p未甲基化的患者，其对化疗不敏感，术后化疗会产生缩短患者生存时间的风险。
6.如权利要求5所述的用途，所述的II级胶质瘤患者接受化疗是指II级胶质瘤患者手术后用烷化剂的治疗。
7.一种II级胶质瘤患者对化疗适用性预测的试剂盒，所述试剂盒包含检测IDH基因型的试剂，以及检测MGMT-p甲基化的试剂。
8.如权利要求5所述的试剂盒，当IDH基因型为野生型且MGMT-p未甲基化的患者，其对化疗不敏感，术后化疗会产生缩短患者生存时间的风险。
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【技术特征摘要】
1.一种对ii级胶质瘤患者分型的标志组合物，标志组合物包括：idh的突变型标志物和mgmt-p的甲基化标志物。
2.如权利要求1所述的标志组合物，其中idh的突变型标志物包括idh1和/或idh2的突变型标志物。
3.一种包含权利要求1所述的标志组合物在制备用于ii级胶质瘤预后评估试剂盒中的用途。
4.如权利要求2所述的用途，其特征在于idh突变型标志物，包括idh1和idh2中的至少一种。
5.如权利要求3或4所述用途，当idh基因型为野生型且mgmt-p未甲基化的患者，其对化疗不敏感，术后化疗...
【专利技术属性】
技术研发人员：张若兰，石乐明，郑媛婷，尚尔菲，孙善月，曹泽慧，陈清旺，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：
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