【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药炮制，尤其涉及一种人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法及其应用。
技术介绍
1、中药依法炮制是根据中医药理论，在辩证施治的基础上逐渐形成独特的中药加工技术，能够起到增效减毒的作用。中药经炮制后可以增效减毒、引药入经、扩大用药范围，既是临床用药的特点之一，也是中药的特色所在，同时还是中药现代化的关键点。但目前，中药炮制存在一些问题亟待解决，例如炮制工艺不规范，炮制参数不统一，炮制机制不明确等。中药通常含有十分复杂的化学成分，包括多种酸碱性、极性、分子量、含量等跨度大的初生与次生代谢产物，炮制方法的不同直接影响到所含化学成分的转化，进而使药物疗效和性味随之产生不同程度的差异。炮制方法对于药物疗效和药性的影响以及中药化学成分的复杂性决定了中药炮制整体质量控制的必然性和挑战性，而后者也使得通过单一的方法和技术难以精准控制中药质量。当前关于中药炮制化学成分转化的研究往往集中于某类已知活性成分中少数几种标志物含量的变化，无法全面反映中药炮制介导的整体性化学转化。
2、来源于五加科人参属的人参(panax ginseng c.a.meyer，pg)、西洋参(panaxquinquefolius l.，pq)和三七(panax notoginseng(burk.)f.h.chen，pn)由于特有的补益作用而在全球范围备受欢迎，多用作补益药、食品添加剂和保健品。研究表明，人参、西洋参和三七在蒸制过程中发生了一系列的化学反应，在药性药味和功能主治等方面均有不同程度的改变。因此，对人参属中药炮制前后化学成分的研究对于
技术实现思路
1、针对以上技术问题，本专利技术提供一种人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法及其应用。该检测方法能够准确检测出人参属中药生品及炮制品中的代谢物，能够从中识别差异标志物并对其直接进行同时分析。识别出的差异标志物可用于区分人参属中药生品及炮制品，并可用于人参属中药炮制品的质量控制。
2、为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法，具体包括以下步骤：
4、s1、以甲醇水溶液为溶剂制备对照品溶液和待测样品的供试品溶液；
5、s2、用超高效液相色谱/离子淌度质谱-四级杆飞行时间质谱(uhplc/im-qtof-ms)对所述对照品溶液和供试品溶液进行代谢物的检测，其中色谱条件为：
6、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
7、流动相a为0.05-0.15％v/v甲酸水溶液，流动相b为乙腈，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：0→2min，15％→22％(b)；2→4min，22％(b)；4→9min，22％→30％(b)；9→10min，30％→32％(b)；10→22min，32％(b)；22→25min，32％→34％(b)；25→39min，34％→60％(b)；39→41min，60％→95％(b)；41→44min，95％(b)；
8、流速：0.2-0.4ml/min；
9、柱温：25-35℃。
10、该检测方法能够高效、精准地分析待测人参属中药生品及其炮制品的全部代谢物，识别差异标志物并对其直接进行同时分析，从而能够筛选出未知代谢物并发现炮制过程中的差异标志物。利用该检测方法所发现的与炮制相关的差异标志物能够用于区分人参属中药生品及其炮制品，并可用于人参属中药的精准质量控制。
11、在uhplc/im-qtof-ms中，本专利技术所选用的上述固定相、柱温、洗脱程序等色谱条件有利于保证代谢物之间得到尽可能的分离，以便于后续的数据处理和分析。流动相对整体液相色谱分离影响较大，经试验发现，在该色谱系统中，用甲醇作为有机相时洗脱程序过程中色谱柱压力相对偏高，对色谱柱及系统损害较大，选用乙腈可以在一定程度上避免该现象；ph值对色谱峰的峰形和分离度也有较大的影响，本专利技术通过研究发现，当在水相中添加0.1％v/v左右甲酸时，色谱峰对称性及分离度较好。甲酸浓度优选0.1％v/v。
12、优选地，所述色谱柱为连接vanguard预柱(2.1×50mm，1.7μm)的csh c18(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱。反相色谱柱在皂苷类成分分离中具有重要作用。csh c18相对于其他常用的反相机制色谱柱能够分离出更多色谱峰，平衡快，且色谱峰峰形对称性好、分离效果好，检出离子个数多。
13、优选地，柱温为30℃。柱温会影响流动相的黏度和密度，进而影响化合物在固定相中的保留行为。在本专利技术的色谱条件下，30℃的柱温更容易保证数据稳定和可靠。
14、优选地，流速为0.3ml/min。
15、结合第一方面，s1中所述甲醇水溶液的甲醇浓度为65～75％v/v。
16、可选地，将待测样品粉末以上述甲醇水溶液为溶剂，在加热超声的条件下进行提取，固液分离后制成供试品溶液。加热温度可选35～45℃，如40℃，超声参数可选400w，40khz。固液分离方式可选择离心或过滤。
17、结合第一方面，uhplc/im-qtof-ms中的质谱采用vion ims-qtof高分辨质谱仪。
18、优选地，质谱条件包括：毛细管电压为1.5kv，锥孔电压为20v，裂解能量为40-60ev。
19、优选地，所述质谱条件还包括：质量依赖梯度裂解能量：30-70/40-80ev；扫描范围：m/z 150-1500；补偿电压：80v；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流速(n2)：800l/h；锥孔气流速：50l/h。
20、优选地，数据采集过程中通过以10μl/min的流速，间隔时间为1min注入外部校正液：200ng/ml亮氨酸脑啡肽溶液进行负离子模式下质量数的精准校正。
21、毛细管电压直接影响电离效率，在本专利技术的检测系统中，当毛细管电压为1.5kv时能够提高供试品检测灵敏度，同时避免母离子源内裂解。
22、锥孔电压主要影响离子进入质谱的速度，锥孔电压高，离子移动速率快、损失减少、检测灵敏度增加、反之则灵敏度下降，但是过高的锥孔电压会增加离子相互间的碰撞、引起源内裂解，产生碎片离子。经试验发现，当锥孔电压为20v时，可以抑制加合离子形式的产生，同时减少源内裂解现象的发生。
23、vion ims-qtof高分辨质谱仪在hdmse模式中具有梯度裂解能量(rce)功能，裂解能量在很大程度上影响二级谱图的质量和可鉴定化合物的数量。实验证明，采用40-60ev的裂解能量可以增加二级碎片信息，为精准表征和鉴定更多化合物提供有利条件，确保鉴定结果的准确性和可靠性。
24、第二方面，本专利技术提供上述检测方法在识别人参属中药生品及炮制品差异标志物中的应用：用所述检测方法检测多批次人参属中药生品及炮制品的代谢物，利用非靶标本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为连接VanGuard预柱的CSH C18色谱柱，所述VanGuard预柱的规格为2.1×50mm，1.7μm，所述CSH C18色谱柱的规格为2.1×100mm，1.8μm；和/或
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S1中所述甲醇水溶液的甲醇浓度为65～75％v/v。
4.根据权利要求1～3任一项所述的检测方法，其特征在于，UHPLC/IM-QTOF-MS中的质谱采用VionIMS-QTOF高分辨质谱仪。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，质谱条件包括：毛细管电压为1.5kV，锥孔电压为20V，裂解能量为40-60eV。
6.权利要求1～5任一项所述的人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法在识别人参属中药生品及炮制品差异标志物中的应用，其特征在于，用所述检测方法检测多批次人参属中药生品及炮制品的代谢物，利用非靶标代谢组学差异分析技术对代谢物数据进行分析，获得
7.一种区分人参生品及炮制品的方法，其特征在于，将丙二酰人参皂苷Rb1、丙二酰人参皂苷Rb2、20(S)-人参皂苷Rh2、20(S)-人参皂苷Rh1、20(R)-人参皂苷Rh2作为区分人参生品及炮制品的差异标志物。
8.一种区分西洋参生品及炮制品的方法，其特征在于，将丙二酰人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb1、丙二酰人参皂苷Rd、人参皂苷Rg5、人参皂苷Rc作为区分西洋参生品及炮制品差异标志物。
9.一种区分三七生品及炮制品的方法，其特征在于，将20(S)-人参皂苷F1、三七皂苷Fa、丙二酰人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、三七皂苷Fd作为区分三七生品及炮制品差异标志物。
...【技术特征摘要】
1.一种人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为连接vanguard预柱的csh c18色谱柱，所述vanguard预柱的规格为2.1×50mm，1.7μm，所述csh c18色谱柱的规格为2.1×100mm，1.8μm；和/或
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，s1中所述甲醇水溶液的甲醇浓度为65～75％v/v。
4.根据权利要求1～3任一项所述的检测方法，其特征在于，uhplc/im-qtof-ms中的质谱采用vionims-qtof高分辨质谱仪。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，质谱条件包括：毛细管电压为1.5kv，锥孔电压为20v，裂解能量为40-60ev。
6.权利要求1～5任一项所述的人参属中药生品及其炮制品代谢物的检测方法在识...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨文志，王慧敏，李雪，胡莹，杨飞飞，赵雨营，荆绮，姜美婷，徐晓艳，王洪达，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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