本发明专利技术公开了一种血栓血块的细胞组成分析方法。本发明专利技术包含以下步骤：(1)脑血栓血块的清洗与剪切；(2)星虫纤溶酶溶液对血块进行降解，收集释放出来的游离细胞；(3)细胞涂片，瑞氏染色，显微镜初步观察血块中细胞形态、数量及种类；(4)常规血常规检测法对血块细胞组成的精确分析。本发明专利技术不仅展示了血栓血块中细胞组成的分析方法，而且操作简单、对设备和技术要求低，能快速获得脑血栓血块的细胞组成定性甚至定量结果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种血栓血块的细胞组成分析方法。
技术介绍
1、脑血管疾病是威胁人类健康的三大疾病之一，其中缺血性脑血管病占80％以上。脑血栓(ct)和脑静脉血栓(cvt)是当今世界最受关注的缺血性脑血管疾病，主要都是由脑血管中的血栓块引起。脑血栓和脑静脉血栓如果治疗不当，会有很高的致残率和死亡率，且患者出院后也有极高的复发率。此外，老年脑血栓患者由于伴有各种慢性疾病，免疫能力下降，更难获得良好的预后。脑血栓的发生与不良因素引起的局部脑血管管腔闭塞或狭窄有关。动脉粥样硬化是其形成的主要原因，它会使大脑局部供血区的血液流动中断，引起脑组织缺氧、缺血和坏死，从而产生与神经系统有关的症状。相反，脑静脉血栓形成是由于血液回流导致血管堵塞，结果血液积聚在脑组织表面或内部，引起脑水肿甚至脑出血。
2、最近，越来越多的研究表明，脑部血栓块的细胞组成与脑血栓的诊断、治疗和预后密切相关。因此，血栓块的组成成分，特别是细胞组成分析数据的可用性对临床诊断和治疗至关重要。但是目前可用的方法无法全面、定性和定量地分析血栓组成成分。例如，基于martius scarlett blue(mbs)的原位染色只能研究某些血栓块切片的红细胞和白细胞。基于免疫组织化学(ihc)的原位染色也只能使用其特异性结合的抗体研究某些血栓块切片的少量血液成分。基于显微图像的方法仅关注血栓块的特定成分。此外，以上这些方法都是费时费力的。迄今为止，对脑血栓细胞成分进行定量和定性研究的方法尚未报道。
技术实现思路
>1、本专利技术的目的在于提供一种血栓血块的细胞组成分析方法。2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种血栓血块的细胞组成分析方法，包含以下步骤：
4、(1)血块预处理
5、在干净的第一载体上，用生理盐水重复清洗血块，并用剪刀对血栓块进行剪切，再用生理盐水重复清洗血块，后将剪切后的血栓块转移到干净的第二载体上；
6、(2)星虫纤溶酶溶液降解血块
7、将星虫纤溶酶溶液加入预置血块的第二载体上，孵育直到整个血块降解，将液体部分转移到ep管中离心去上清，底部细胞沉淀与生理盐水轻轻混合保存；
8、(3)细胞样品染色
9、调节细胞密度后滴加于载玻片上，涂抹，于室温下待液体蒸发；载玻片上滴加染液，使两者充分混合均匀，室温下条件下充分染色；在显微镜下观察不同血块所包含细胞的种类、形态及数量比例状况；
10、(4)血常规检查
11、调节细胞密度后使用血液分析仪对包括血小板、红细胞、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞在内的细胞组成成分进行分析。
12、进一步地，步骤(1)中，剪成最大直径小于5mm的小块。
13、进一步地，步骤(2)中，加入的星虫纤溶酶溶液为200μl-400μl/g血栓，星虫纤溶酶溶液单位为1500u/ml-2500u/ml。
14、进一步地，步骤(2)中，孵育温度为36℃-38℃。
15、进一步地，步骤(2)中，离心条件为(100-300)×g、3-5℃。
16、进一步地，步骤(3)中，染液包括瑞氏染液a液和瑞氏染液b液。
17、进一步地，步骤(3)，所述调节细胞密度为细胞密度1x105-1x107个细胞/ml。
18、进一步地，步骤(4)中，所述调节细胞密度为细胞密度1x105-1x107个细胞/ml。
19、进一步地，所述的血栓血块包括动脉血栓血块和静脉血栓血块。
20、进一步的，步骤(1)中，第二载具为u形血凝反应板。
21、本专利技术还提供所述的方法在制备血栓预防药物、诊断试剂、治疗药物、药物开发中的应用。
22、本专利技术的有益效果在于：(1)星虫纤溶酶(sfe)是一种纤维蛋白溶解剂，可以直接、有效地降解纤维蛋白，释放出血栓块内包裹的细胞。(2)申请人发现，经sfe处理后，这些释放出来的细胞其细胞类型和结构没有受到显著影响。(3)首次建立了一种新的、简单有效的分析脑血栓血块细胞组成的方法。
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【技术保护点】
1.一种血栓血块的细胞组成分析方法，包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，剪成最大直径小于5mm的小块。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，加入的星虫纤溶酶溶液为200μL-400μL/g血栓，星虫纤溶酶溶液单位为1500U/mL-2500U/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，孵育温度为36℃-38℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，离心条件为100-300×g、3-5℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，染液包括瑞氏染液A液和瑞氏染液B液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)，所述调节细胞密度为细胞密度1x105-1x107个细胞/mL。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述调节细胞密度为细胞密度1x105-1x107个细胞/mL。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的血栓血块包括动脉血栓血块和静脉血栓血块。
10.根据权利要求1至8任一项所述的方法在制备血栓预防药物、诊断试剂、治疗药物、药物开发中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种血栓血块的细胞组成分析方法，包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，剪成最大直径小于5mm的小块。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，加入的星虫纤溶酶溶液为200μl-400μl/g血栓，星虫纤溶酶溶液单位为1500u/ml-2500u/ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，孵育温度为36℃-38℃。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，离心条件为100-300×g、3-5℃。
6.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐明青，林宏峻，严慧，许瑞安，崔秀灵，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：
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