一种基于位点特异性重组的基因打靶载体快速构建方法技术

本发明专利技术属于生物技术和基因工程技术领域，具体为一种基于φＢＴ１整合酶及其突变识别位点的基因打靶载体快速构建方法。本发明专利技术通过严格突变筛选和验证，提供三对突变的整合酶识别序列，突变的底物对参与反应效率与野生型相当，且在同一体系中表现为不兼容。在此基础上，构建一整套相关载体，包括一个可实现大肠杆菌－天蓝色链霉菌穿梭的骨架载体，以及三个含有突变底物对用于同源臂构建和筛选的ＴＡ克隆载体，并提供四个ＤＮＡ片段体外串联重组反应的具体方法。本发明专利技术方法简单、快速并且高效，可用于链霉菌的基因打靶载体的构建；并可通过相应原件替换，广泛用于不同物种基因打靶载体的快速构建。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
三对突变的φＢＴ１整合酶识别的重组位点序列，其特征在于为ａｔｔＰ↓［６］、ａｔｔＰ↓［１３］、ａｔｔＰ↓［１５］和ａｔｔＢ↓［６］、ｘａｔｔＢ↓［１３］、ａｔｔＢ↓［１５］位点，其序列依次如ＳＥＱ　Ｎｏ．１１、ＳＥＱ　Ｎｏ．１２、ＳＥＱ　Ｎｏ．１３以及序列ＳＥＱＮｏ．３和ＳＥＱ　Ｎｏ．４、ＳＥＱ　Ｎｏ．５和ＳＥＱ　Ｎｏ．６、ＳＥＱ　Ｎｏ．７和ＳＥＱ　Ｎｏ．８所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁晓明，张霖，张渤，赵国屏，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]