【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属于作物分子遗传学和分子育种，特别是涉及一种与花生叶片大小紧密连锁的分子标记e5及其应用。
技术介绍
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技术介绍
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1、花生是我国重要的油料作物，富含人类所需的多种营养元素，如脂肪酸、蛋白质、维生素e和钙、铁、锌、硒等微量元素。栽培花生(aabb，2n＝4x＝40)是异源四倍体，由两个不同基因组类型的二倍体野生种天然异交加倍后驯化而来，其基因组结构复杂，且遗传研究进展对较缓慢。随着野生二倍体花生和栽培种花生的测序工作陆续完成，花生分子遗传学的研究也进入了一个新的阶段。叶片大小是花生非常重要的性状，与产量、株型息息相关，花生的真叶由叶片、叶柄和叶托三部分组成，花生属内除三叶区组(trierectoides)野生种具有3小叶羽状复叶外，其他种包括花生栽培种，均为4小叶羽状复叶。叶片大小和形状是鉴别类型的重要依据之一，普通型品种叶片一般为倒卵形，大小中等；龙生型品种多为倒卵形，叶片有大有小；珍珠豆型和多粒型品种呈椭圆形，叶片较大。
2、植物的光合作用与蒸腾作用是通过叶片进行的，而叶片又是水分和养分运输、光合产物输出、生长发育的重要营养器官。因此，叶的发育状态及叶片的大小是保障花生高产的必要条件之一。王在序等利用原子示踪技术测定，发现在结荚期，主茎叶片产生的光合产物，在结荚期(6天后)，将32.4％的物质运输到株的荚果(王在序，1978)。同时叶也是植株蒸腾作用的重要器官，根部吸收的水分，绝大部分以水气形式从叶面扩散到体外，是植物的被动吸收水分的动力，可以有效地降低叶片温度，防止因高温造成伤害。在干
3、近年来，随着对花生表型性状的深入研究，对其叶片大小的遗传规律也有了一定的认识。廖伯寿等用窄叶花生小柳叶和正常叶花生鄂花四号、海花一号、鲁花一号为材料进行杂交，对三组花生叶片形状的遗传特征进行了分析，实验结果显示，3个组合的f1叶宽都比其父母本的平均叶宽要小，揭示其叶片宽度趋向于窄叶亲本，f2代的窄叶与宽叶的分离率为3:1，这表明窄叶亲本的狭叶性状是由一对单基因控制(廖伯寿等，1993)。甘信民等用具有倒卵形叶片的花生金堂深窝和具有长椭形叶片的花生新成早、花37为材料进行有性杂交，结果显示f1全是倒卵形的花生，f2分离比率符合两对基因的遗传分离比例(15:1)，由此可见花生叶片的倒卵形对长椭形呈显性，且叶形由两对基因控制(甘信民等，1984)。balaiah等用j.11(spanish)、a.k.12-24(spanish)、s.206(spanish)、tmv.7(spanish)、"kadiri-71-1"(virginia runner)、c.i48(virginia runner)这五个品种作物母本，gujarat作为父本进行6组杂交，f1均为窄叶，在f2代窄叶与宽叶的分离比例为3：1，说明窄叶对宽叶是单显性，这结果与廖伯寿的研究结果一致。亲本j.11、a.k.12-24和s.206的叶色均呈浅绿色，，亲本g.n.l.突变体的叶色为深绿色，杂交而成的f1全部为中绿色，f2群体中深绿：绿：浅绿为1:2:1，表现出叶色不完全显性(balaiah et al.，1977)。branch等通过对卷叶花生品种gs-97进行遗传研究，以卷叶为母本分别与两个普通叶优良育种系ga-2463和ga-2522进行杂交。各杂交组合获得的f1叶形均为正常形叶片，表明卷叶性状为隐性性状，(branch et al.,1987)，自交f2正常叶片与卷叶的比例符合一对基因的遗传分离比例(3:1)，这些数据都有力地表明，卷叶性状是由单个隐性基因控制的(branch et al.,1995)。
4、迄今，还没有针对花生叶片大小相关基因位点较为准确的定位与可用于分子标记辅助选择标记的开发。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种与花生叶片大小紧密连锁的分子标记e5及其应用，通过检测与花生叶片大小相关基因位点连锁的分子标记的基因型，对后代个体叶片大小等位基因位点及性状进行标记辅助选择，提高性状的选择效率、加快育种进度，为加快花生叶型新品种选育提供理论依据和技术支撑。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、本专利技术提供一种与花生叶片大小紧密连锁的分子标记e5，所述分子标记e5位于花生第15号染色体156,605,322～158,078,183共1.47mb区间内，其对应的大叶花生品种平度9616的2kb范围的序列如seq id no.1所示，其对应的小叶花生品种florunner的2kb范围的序列如seq id no.2所示。
4、seq id no.1：
5、acttcaaaaactggtttttttttccttacttcagcataaacaaaatttttctttttgtgtc
6、tccttgcatgttgctgagatgttctctcccaagtcaactcctcgaactttgtgctacacc
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17、acaatgttgtgtgcataaaaccttgcaagcagcaacggttta本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记E5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记E5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增总体积10uL：DNA模板100-200ng/uL 1uL，引物对10uM各0.5uL，2×Taq Accurate Buffer 5uL，RNase free water 3uL。
3.根据权利要求1所述利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记E5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增反应条件：预变性94℃30s；98℃10s，55℃30s，72℃1min，35个循环；72℃延伸2min。
4.根据权利要求1所述利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记E5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，在步骤(3)中，采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
5.分子标记E5的引物对在花生叶片大小的遗传改良中分子标记辅助选择中的应用，其特征在于，所述引物对为E5-F/R的序列如下：
【技术特征摘要】
1.利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记e5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述利用与花生叶片大小紧密连锁的分子标记e5鉴定花生叶片大小的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述pcr扩增总体积10ul：dna模板100-200ng/ul 1ul，引物对10um各0.5ul，2×taq accurate buffer 5ul，rnase free water 3ul。
3.根据权利要求1所述利用与花生叶片大小紧密连锁的分...
【专利技术属性】
技术研发人员：于晓娜，梁天柱，杨明松，梁燕，张晓军，倪郁，邹晓霞，司彤，王若钰，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：
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