一种对脑内神经元高特异性识别和成像的方法技术

技术编号:40180461 阅读:25 留言:0更新日期:2024-01-26 23:46
本发明专利技术提供一种对脑内神经元高特异性识别和成像的方法,包括以下步骤:1)构建一种稀疏标记系统,其包括:稀疏标记质粒和酶表达质粒,根据所成像的不同的模式生物设计不同的启动子;2)将稀疏标记质粒和酶表达质粒以1:25~1:250的配比导入脑组织,并表达;3)将脑组织切割成小块,使用戊二醛固定液固定;4)加入甘氨酸中和液中和;5)加入底物分子反应液,使酶催化底物分子聚合生成X射线可见的聚合物;6)去除反应液,使用固定液固定脑组织;以及7)进行同步辐射X射线成像,实现脑内特定类型神经元的定位、分辨和观察。根据本发明专利技术,提供了一种能对脑神经元细胞类型进行高特异性识别和成像的方法,具有良好的生物医学应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化学,更具体地涉及一种对脑内神经元高特异性识别和成像的方法


技术介绍

1、脑神经科学研究是人类科学最后的前沿,是最具挑战性的研究领域。脑科学的关键研究是要在介观层面上弄清大脑神经网络,现有电镜和光学显微成像方法组织穿透深度低、样品制备复杂,难以兼顾成像视野、速度和分辨率的需求,使得在全脑层面开展神经联接网络困难重重。近年来发展起来的同步辐射成像具有很多优势:高分辨、深穿透、无须透明样品保留组织完整性;成像速度快,成像1mm3体量的脑组织只需1min;更重要的是,还具有良好的元素能量分辨。

2、同步辐射x-ray神经网络结构成像目前用的是高尔基染色技术,该技术获得了1906年的诺贝尔生理学或医学奖。但是同步辐射应用于脑成像做深入研究,必须进行功能性标记。功能成像中,遗传学标记针对的靶标可以是任意感兴趣的蛋白/神经元,是特异性最高的。已有的成像技术中,适合光学成像的绿色荧光蛋白(gfp)探针的发展及应用获得了2008年诺贝尔化学奖,近期,电镜技术也发展了与之匹配的遗传标记探针。x-ray一直没有相适应的遗传编码探针。

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【技术保护点】

1.一种对脑内神经元高特异性识别和成像的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述稀疏标记系统包括:Cre-lox重组酶系统、Flp-FRT重组酶系统、Dre-rox重组酶系统。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述酶表达质粒中的酶包括:抗坏血酸过氧化物酶、迷你单线态氧产生蛋白、四半胱氨酸肽或辣根过氧化物酶。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述模式生物包括:果蝇、斑马鱼、小鼠。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中,将质粒导入脑组...

【技术特征摘要】

1.一种对脑内神经元高特异性识别和成像的方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述稀疏标记系统包括:cre-lox重组酶系统、flp-frt重组酶系统、dre-rox重组酶系统。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述酶表达质粒中的酶包括:抗坏血酸过氧化物酶、迷你单线态氧产生蛋白、四半胱氨酸肽或辣根过氧化物酶。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,所述模式生物包括:果蝇、斑马鱼、小鼠。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中,将质粒导入脑组织的方式包括:a)将所述稀疏标记质粒和所述酶表达质粒直接注射进入脑组织;b)将所述稀疏标记质粒和所述酶表达质粒转染进入脑组织中,所述转染的手段包括:磷酸钙法、脂质体法、聚乙烯亚胺法、以及病毒法。

【专利技术属性】
技术研发人员:诸颖殷大鹏孔华庭张继超王丽华樊春海
申请(专利权)人:中国科学院上海高等研究院
类型:发明
国别省市:

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