【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合及其应用，属于病毒检测。
技术介绍
1、
2、鹅星状病毒(goose astrovirus,goastvs)是一种小的无囊膜病毒，其基因组由单链正义rna组成。2016年，发现了一种新型goastv，与以往报道的禽星状病毒具有很大的差异，其全基因组同源性为46.5％～62.0％，编码衣壳蛋白的orf2基因氨基酸序列的同源性仅为27.3％～57.0％，与禽星状病毒属的其他代表性毒株的遗传距离较远。这种新型goastv可致小鹅痛风，死亡率约为50％。goastv还能引起鸡和鸭的痛风，这表明它有跨越物种屏障的能力。
3、小鹅瘟是由鹅细小病毒(gosling plague virus,或goose parvovirus,gpv)引起雏鹅和雏番鸭的渗出性肠炎，是一种急性、高度传染性和致死性的疾病，主要体征是喙短、舌头突出、生长缓慢、胫骨短或粗，主要症状是水样腹泻。20日龄的鹅易感，传播迅速且死亡率高(5天内达到>95％)。gpv是一种无囊膜的单链dna病毒，基因组长度约为5.1kb，基因组主要由两端的反向末端重复(itr)序列和两个开放阅读框组成，基因组左边的开放阅读框(orfs)编码非结构蛋白，是病毒基因组复制和衣壳基因表达调控所必须的；右边的开放阅读框为orf1和orf2；orf1编码ns蛋白，orf2编码三种结构蛋白：vp1，vp2和vp3。2015年，中国首次在樱桃谷鸭和半番鸭发生短喙侏儒综合征(short beak an
4、h5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,aiv)基因组为分节段单股负链rna，含有8个基因片段，根据其囊膜蛋白血凝素(ha)可将其分为不同亚型h1-h18，其中h5亚型高致病性禽流感严重危害养禽业和公共卫生而受到广泛关注。自从h5n1亚型hpai病毒(highly pathogenic avian influenza virus，hpaivs)1996年首次报道出现，gs/gd谱系病毒和它的重组毒株(如h5n2、h5n5、h5n6和h5n8)持续引起家禽和野鸟暴发禽流感并造成大量死亡。目前h5n1 gs/gd谱系hpai病毒已进化为10个基因不同的病毒clade(clade0-clade9)和多个亚分支，包括当前优势流行的clade2.3.4.4亚分支。goastv、gpv和h5 hpaiv均能引起鹅的死亡，因此加强goastv、gpv和h5 hpaiv检测，对于控制goastv、gpv和h5hpaiv的发生、传播和防制具有重要意义。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术的第一目的是提供了一种特异性好、灵敏度高、可同时检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合。本专利技术的第二目的是提供了上述引物和探针组合在制备试剂盒中的应用。
2、技术方案：本专利技术的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，包括特异性检测鹅星状病毒的上游引物seq id no.1、下游引物seq id no.2、探针seq id no.3；特异性检测小鹅瘟病毒的上游引物seq id no.4、下游引物seq id no.5、探针seq id no.6；特异性检测h5亚型禽流感病毒的上游引物seq id no.7、下游引物seq idno.8、探针seq id no.9。
3、进一步地，所述探针的5’端标记有不同的荧光基团；所述探针的3’端标记有mgb淬灭基团。
4、进一步地，所述荧光基团包括cy5荧光基团、fam荧光基团和vic荧光基团。
5、进一步地，所述特异性检测鹅星状病毒的引物和探针可用于检测genbank登录号为on205965的鹅星状病毒毒株。
6、进一步地，所述特异性检测小鹅瘟病毒的引物和探针可用于检测genbank登录号为mh717785、mf405917和kt751090的小鹅瘟病毒毒株。
7、进一步地，所述特异性检测h5亚型禽流感病毒的引物和探针可用于检测genbank登录号为mk554842、mz603893、jq973670、ok583835和kt221066的h5亚型禽流感病毒毒株。
8、本专利技术的上述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合在制备试剂盒中的应用。
9、进一步地，所述试剂盒中还包括dna聚合酶、逆转录酶、rna酶抑制剂、pcr反应液。
10、进一步地，所述试剂盒中还包括阳性对照和阴性对照。
11、进一步地，所述阳性对照为含有对应引物和探针组合扩增的目的片段的重组质粒。
12、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下突出的显著优点：本专利技术的引物和探针组合可用于同步检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒，结合荧光定量pcr技术，检测结果特异性好、灵敏度高、病毒载量检测结果准确。只需提取一次核酸即可检测3种鹅的常见感染病毒，使整个检测过程更加快速、高效。
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1.一种检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，包括特异性检测鹅星状病毒的上游引物SEQ ID NO.1、下游引物SEQ ID NO.2、探针SEQID NO.3；特异性检测小鹅瘟病毒的上游引物SEQ ID NO.4、下游引物SEQ ID NO.5、探针SEQID NO.6；特异性检测H5亚型禽流感病毒的上游引物SEQ ID NO.7、下游引物SEQ ID NO.8、探针SEQ ID NO.9。
2.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述探针的5’端标记有不同的荧光基团；所述探针的3’端标记有MGB淬灭基团。
3.根据权利要求2所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光基团包括CY5荧光基团、FAM荧光基团和VIC荧光基团。
4.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述特异性检测鹅星状病毒的引物和探针可用于检测GenBank登录号为ON205
5.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述特异性检测小鹅瘟病毒的引物和探针可用于检测GenBank登录号为MH717785、MF405917和KT751090的小鹅瘟病毒毒株。
6.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述特异性检测H5亚型禽流感病毒的引物和探针可用于检测GenBank登录号为MK554842、MZ603893、JQ973670、OK583835和KT221066的H5亚型禽流感病毒毒株。
7.一种权利要求1～3任一项所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、H5亚型禽流感病毒的引物和探针组合在制备试剂盒中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中还包括DNA聚合酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂、PCR反应液。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中还包括阳性对照和阴性对照。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述阳性对照为含有对应引物和探针组合扩增的目的片段的重组质粒。
...【技术特征摘要】
1.一种检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，包括特异性检测鹅星状病毒的上游引物seq id no.1、下游引物seq id no.2、探针seqid no.3；特异性检测小鹅瘟病毒的上游引物seq id no.4、下游引物seq id no.5、探针seqid no.6；特异性检测h5亚型禽流感病毒的上游引物seq id no.7、下游引物seq id no.8、探针seq id no.9。
2.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述探针的5’端标记有不同的荧光基团；所述探针的3’端标记有mgb淬灭基团。
3.根据权利要求2所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述荧光基团包括cy5荧光基团、fam荧光基团和vic荧光基团。
4.根据权利要求1所述的检测鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、h5亚型禽流感病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述特异性检测鹅星状病毒的引物和探针可用于检测genbank登录号为on205965的鹅星状病毒毒株。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓文，蔡淼，刘秀梵，王晓泉，刘开拓，胡顺林，顾敏，胡娇，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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