【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类性别鉴定，尤其涉及一种用于同源四倍体鲫性别鉴定的分子标记及其相关产品和鉴定方法。
技术介绍
1、作为低等脊椎动物，鱼类在物种和性别决定机制方面都具有非凡的多样性。此外，经济性状的二态性在鱼类中极为常见。因此，从科学研究或经济利益的角度来看，鱼类性别决定机制一直备受关注。性别决定是指在发育的初始阶段控制性腺原基命运的机制，负责成熟个体的性别。性别决定是决定性别发展方向的生物学过程，性别通常是水生动物的一个重要特征。作为低等脊椎动物，鱼类模型有助于了解脊椎动物的性别决定和进化史。和大多数脊椎动物一样，许多鱼类也表现出雌雄异体性，即它们在外部形态和生理特征上存在明显的雌性和雄性差异。尽管大多数鱼类在生长过程中表现出性别二态性，但在外部形态上，雌性和雄性鱼通常没有明显的差异，特别是在性腺尚未成熟时，往往很难从外部特征来区分它们的性别。事实上，有一些鱼类甚至显示天然的性别反转现象，这意味着它们在不同的环境条件下或经过人工干预可以改变其生理性别，但这些性别改变前后在外部形态上没有差异，因此无法通过外观来识别它们的遗传性别。因此这些问题给单性育种、养殖及相关的遗传学基础研究带来很大的困扰，尤其在性别决定分子机制研究方面。
2、同源四倍体鲫(autotetraploid carassius auratus,4nrcc，4n＝200)来源于红鲫(♀，carassius auratus red var.,2nrcc,2n＝100)与团头鲂(♂,megalobramaamblycephala，bsb，2n＝48)的亚科间
3、迄今为止，可以能够快速鉴定同源四倍体鲫性别的分子标记尚未报道。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，提供一种能够快速、简便和准确的鉴定同源四倍体鲫的遗传性别的特异性分子标记、引物对、试剂盒和方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
3、第一方面，本发提供一种鉴定同源四倍体鲫性别的分子标记，所述分子标记为雄性同源四倍体鲫中插入的特异性核苷酸序列，其核苷酸序列为ggttcaataatgactgatcacaggtt，如seq id no.1所示。该特异性核苷酸序列仅存在于雄性同源四倍体鲫中，在雌性中不存在该特异性核苷酸序列。
4、第二方面，本发提供一种用于扩增所述分子标记的引物对，所述引物对包括上游正向引物male-primer-f和下游反向引物male-primer-r，其核苷酸序列为：
5、male-primer-f：5’-ggttcaataatgactgatcaca-3’(如seq id no.2所示)；
6、male-peimer-r：5’-ttagggagtacgtgctattt-3’(如seq id no.3所示)。
7、第三方面，本发提供一种用于鉴定同源四倍体鲫性别的试剂盒，包括所述的引物对。
8、上述的试剂盒，优选的，所述试剂盒还包括tag dna polymerase、延伸促进因子、dntp、缓冲体系以及ddh2o中的一种或多种。
9、第四方面，本发提供一种鉴定同源四倍体鲫性别的方法，包括如下步骤：
10、(1)提取待检同源四倍体鲫的dna样本；
11、(2)以步骤(1)提取的dna样本为模板，采用如seq id no.2～3所示的引物对进行pcr扩增，并将pcr扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；
12、(3)若所述琼脂糖凝胶电泳的结果显示出单一的特异性条带，则表示所述待检同源四倍体鲫为雄性；若所述琼脂糖凝胶电泳的结果未显示条带，则表示所述待检同源四倍体鲫为雌性。
13、上述鉴定同源四倍体鲫性别的方法，优选的，所述pcr扩增的反应体系为：dan模板1μl，rapid taq master mix 5μl，正反向引物各0.4μl，最后添加ddh2o 3.2μl补至总体积10μl；所述rapid taq master mix中含有tag dna polymerase、延伸促进因子、dntp以及缓冲体系。
14、优选的，所述pcr扩增的条件为：95℃预变性3min，95℃变性15s，46℃退火15s，72℃延伸15s，35个循环，然后72℃最终延伸5min，最后4℃进行保存。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
16、1、本专利技术所提供的同源四倍体鲫遗传性别特异性分子标记可以不受同源四倍体的生长阶段限制，可以用于同源四倍体鲫的早期选育时期，节省时间成本；且特异性分子标记准确可靠，操作简单，不需要进行活体解剖就能够鉴别雌雄个体，降低了鉴定成本。
17、2、本专利技术的特异性分子标记和鉴定方法，为同源四倍体鲫性别的辅助选择提供了科学依据，为同源四倍体鲫鱼类的性别控制育种具有重要的研究意义，也为其它多倍体鱼类开发性别特异性分子标记的方法提供了参考依据。
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1.一种鉴定同源四倍体鲫性别的分子标记，其特征在于，所述分子标记为雄性同源四倍体鲫中插入的特异性核苷酸序列，其核苷酸序列为GGTTCAATAATGACTGATCACAGGTT。
2.一种用于扩增权利要求1中所述分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游正向引物Male-primer-F和下游反向引物Male-primer-R，其核苷酸序列为：
3.一种用于鉴定同源四倍体鲫性别的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物对。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Tag DNAPolymerase、延伸促进因子、dNTP、缓冲体系以及ddH2O中的一种或多种。
5.一种鉴定同源四倍体鲫性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的鉴定同源四倍体鲫性别的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：DAN模板1μL，Rapid Taq Master Mix 5μL，正反向引物各0.4μL，最后添加ddH2O 3.2μL补至总体积10μL；所述Rapid Taq Master M
7.根据权利要求5所述的鉴定同源四倍体鲫性别的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：95℃预变性3min，95℃变性15s，46℃退火15s，72℃延伸15s，35个循环，然后72℃最终延伸5min，最后4℃进行保存。
8.根据权利要求5所述的鉴定同源四倍体鲫性别的方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳为2％的琼脂糖凝胶电泳，电压为220V，电流120mA，运行时间为15min。
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定同源四倍体鲫性别的分子标记，其特征在于，所述分子标记为雄性同源四倍体鲫中插入的特异性核苷酸序列，其核苷酸序列为ggttcaataatgactgatcacaggtt。
2.一种用于扩增权利要求1中所述分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对包括上游正向引物male-primer-f和下游反向引物male-primer-r，其核苷酸序列为：
3.一种用于鉴定同源四倍体鲫性别的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物对。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括tag dnapolymerase、延伸促进因子、dntp、缓冲体系以及ddh2o中的一种或多种。
5.一种鉴定同源四倍体鲫性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：覃钦博，刘少军，张坤，黄旭，汪重庆，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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