【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物实验模型构建的，尤其涉及一种mhc单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型的建立方法。
技术介绍
1、异基因造血细胞移植(allogeneic hematopoietic cell transplantation,allohct)是血液系统恶性肿瘤的一种有效治疗策略。这种疗法的效果与受者移植后免疫功能状态有关，受者免疫细胞重建的数量和质量可影响其移植后早期并发症的发生率和严重程度以及长期生存。多项临床研究表明，主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex，mhc)不合程度与移植后免疫重建水平相关。但由于临床背景下存在众多影响免疫重建的因素，如：移植物来源(骨髓、外周血、脐带血)和造血细胞的数量、使用免疫抑制剂、移植物抗宿主病的严重程度等，仅根据临床证据难以得出mhc不合与免疫重建直接相关的结论。因此，建立单纯的mhc单倍型相合异基因造血细胞移植动物模型进行免疫重建监测对于阐明上述问题有重要意义。
2、在正常机体中，t细胞发育成熟与胸腺功能密切相关。由携带特异性tcr的胸腺细胞与自身肽/mhc复合物相互作用，诱导淋巴祖细胞获得mhc限制性并继续分化为cd4或者cd8单阳性成熟t细胞。mhc分子在这一过程中发挥着不可替代的关键作用，然而，mhc不合是否通过干扰移植受者胸腺功能进而影响allohct后免疫重建迄今尚无报道。临床上对移植后受者进行胸腺取材不具备可操作性，相对而言，对小鼠进行胸腺取材更为方便且可以给予各种处理以揭示mhc不合对胸腺功能和移植后免疫重建的影响以
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是：如何构建一种小鼠模型，该小鼠模型可用于研究mhc单倍型和mhc全相合在骨髓细胞移植受鼠中的免疫重建机理及治疗效果评价。
2、为解决该技术问题，第一个方面本专利技术提供一种构建小鼠模型的方法，所述方法包括a1)或/和a2)：
3、a1)、将供鼠的骨髓细胞移植到经亚致死剂量照射的受鼠体内，得到mhc单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型，所述供鼠和所述受鼠的mhc单倍型相合；
4、a2)、将供鼠的骨髓细胞移植到经亚致死剂量照射的受鼠体内，得到mhc全相合异基因造血细胞移植小鼠模型，所述供鼠和所述受鼠的mhc全相合。
5、进一步地，上述的方法中，a1)所述供鼠和受鼠的mhc分子为半相合，cd45分子亚型相同；a2)所述供鼠和受鼠的mhc分子完全相合，而cd45分子亚型不同。
6、在本专利技术的一个实施例中，a1)所述供鼠和受鼠的cd45分子亚型相同，均为cd45.2。
7、在本专利技术的一个实施例中，a2)所述供鼠的cd45分子亚型为cd45.1，受鼠的cd45分子亚型为cd45.2。
8、进一步地，上述的方法中，a1)所述供鼠的mhc为h-2kb(即所述小鼠的mhc表面分子为h-2kb)，所述受鼠的mhc为h-2kb/d(即所述小鼠的mhc表面分子为h-2kb/d)。
9、进一步地，上述的方法中，a2)所述供鼠的mhc为h-2kb(即所述小鼠的mhc表面分子为h-2kb)，所述受鼠的mhc为h-2kb(即所述小鼠的mhc表面分子为h-2kb)。
10、进一步地，上述的方法中，a1)所述受鼠为cb6f1小鼠，所述供鼠为c57bl/6小鼠。
11、进一步地，上述的方法中，a2)所述受鼠为129sv小鼠，所述供鼠为c57bl/6小鼠。
12、进一步地，上述的方法中，所述方法包括下述步骤：
13、b1)、获取供鼠骨髓细胞；
14、b2)、对受鼠进行亚致死剂量照射处理；
15、b3)、将b1)获取的供鼠骨髓细胞移植到受鼠体内。
16、进一步地，上述的方法中，b1)所述获取供鼠骨髓细胞包括如下步骤：
17、b1-1)、对受鼠进行抗生素给药；
18、b1-2)、取供鼠股骨及胫骨的骨髓细胞；
19、b1-3)、红细胞裂解液处理获得骨髓细胞后离心收集细胞沉淀；
20、b1-4)、用dpbs溶液重悬细胞沉淀即获得供鼠骨髓细胞。
21、进一步地，上述的方法中，所述亚致死剂量照射包括如下步骤：移植前一天将所述受鼠在γ射线生物辐照器内进行60coγ全身辐照，辐照总剂量为8gy。
22、在本专利技术的一个实施例中，所述亚致死剂量照射分2次完成，每次剂量为4gy，2次辐照间隔4小时。
23、进一步地，上述的方法中，b3)所述将b1)获取的供鼠骨髓细胞移植到受鼠体内的移植方式为尾静脉注射。
24、进一步地，上述的方法中，所述方法还包括对获得的小鼠实验模型的评价方法，所述评价方法包括b4-1)-b4-3)：
25、b4-1)、供鼠骨髓细胞占比高于90％为完全植入；
26、b4-2)、供鼠骨髓细胞占比在20％-90％之间为混合植入；
27、b4-3)、供鼠骨髓细胞占比低于20％为移植失败。
28、进一步地，上述的方法中，所述mhc单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型和mhc全相合异基因造血细胞移植小鼠模型的供鼠骨髓细胞占比高于90％。
29、第二个方面，本专利技术提供应用，所述应用为上述方法制备的小鼠模型在下述任一项中应用，
30、c1)、在制备mhc全相合和/或单倍型相合异基因造血细胞移植的机理研究的产品中的应用；
31、c2)、在制备mhc全相合和/或单倍型相合异基因造血细胞移植的效果评价的产品中的应用。
32、进一步地，上述的应用中，c2)所述应用为下述任一种：
33、c2-1)、在制备mhc全相合和/或单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型外周血中免疫细胞亚群重建评价的产品中的应用；
34、c2-2)、在制备mhc全相合和/或单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型t细胞体外功能评价的产品中的应用；
35、c2-3)、在制备mhc全相合和/或单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型胸腺形态结构及功能评价的产品中的应用。
36、本专利技术中，所述供鼠和受鼠均可为6-8周龄的小鼠。
37、本专利技术中，所述供鼠和受鼠均可为雌性小鼠。
38、本专利技术的有益效果为：
39、本专利技术选择野生型c57bl/6小鼠作为mhc单倍型相合及mhc全相合异基因造血细胞移植的供鼠，cb6f1小鼠作为mhc单倍型相合异基因造血细胞移植的受鼠。同时选择野生型129sv小鼠作为mhc全相合造血细胞移植的受鼠，并以此作为单倍型移植模型的对照。设置建模条件，通过生存状况，移植物抗宿主病及排异反应观察，流式细胞术和组织病理切片等方法评估模型建立状况，以证明此模型可靠且稳定。
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1.一种构建小鼠模型的方法，所述方法包括A1)或/和A2)：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：A1)所述供鼠和受鼠的MHC分子为半相合，CD45分子亚型相同；A2)所述供鼠和受鼠的MHC分子完全相合，而CD45分子亚型不同。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法包括下述步骤：
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述亚致死剂量照射包括如下步骤：移植前一天将所述受鼠在γ射线生物辐照器内进行60Coγ全身辐照，辐照总剂量为8Gy。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：B3)所述将B1)获取的供鼠骨髓细胞移植到受鼠体内的移植方式为尾静脉注射。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于：所述MHC单倍型相合异基因造血细胞移植小鼠模型和MHC全相合异基因造血细胞移植小鼠模型的供鼠骨髓细胞占比高于90％。
9.应用，其特
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：C2)所述应用为下述任一种：
...【技术特征摘要】
1.一种构建小鼠模型的方法，所述方法包括a1)或/和a2)：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：a1)所述供鼠和受鼠的mhc分子为半相合，cd45分子亚型相同；a2)所述供鼠和受鼠的mhc分子完全相合，而cd45分子亚型不同。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述方法包括下述步骤：
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述亚致死剂量照射包括如下步骤：移植前一天将所述受...
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