【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于血型抗体，具体涉及一种分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株、红细胞a抗体及应用。
技术介绍
1、红细胞血型是根据血液中红细胞膜表面抗原来划分的，根据抗原种类的不同，可以划分出20多个常见的分类系统，其中包括abo血型系统和rhd血型系统。正确的血型鉴定对输血至关重要，输入不相容的血型会导致溶血的发生，进而导致严重的医疗事故。因此，快速、准确、操作简便的血型鉴定方法可为抢救危急病人、应对突发事件提供保障。
2、血型鉴定主要分为凝集法和基因法两大类。凝集法的原理为检测血液中红细胞（rbc）表面抗原，只要rbc表面存在相应抗原，即可与相应抗体发生凝集反应，包括纸片法、试管法、微柱法等。其优点是检测速度快，将预先准备好的商业化单克隆抗体放置/包被到检测装置中，检测时加入含红细胞的全血或红细胞悬浮液与对应的单克隆抗体结合。目前使用的大部分商业化单克隆抗体都依赖于进口，不仅价格较高，还极大了限制了血型研究在我国的发展。已有学者提出可以利用杂交瘤技术、基因工程、eb病毒转化等技术手段来制备所需的单克隆抗体。文献资料《特异性抗ab-血型抗原的单克隆抗体制备及初步鉴定》（2021年）公开了以人ab型红细胞为免疫原，通过杂交瘤技术获得了1株分泌抗-ab血型的单克隆抗体杂交细胞瘤。但该技术方法是以人ab型红细胞作为免疫源，但人细胞上存在的细胞膜抗原种类繁多、性质复杂，不同的细胞作为免疫原会激发不同的抗体，因此该技术方案得到的抗体不能保证稳定量产，推广到工业化制备应用上具有困难。因此，有必要开发新的用于血型检测的单克隆抗体，以补充现有
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株、红细胞a抗体及应用，具体技术方案如下。
2、分泌特异性红细胞抗体a的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为c1，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为cgmcc no.45726。具体菌种保藏信息如下所示。
3、杂交瘤细胞株c1于2023年9月27日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（简称cgmcc，地址：北京市朝阳区，中国科学院微生物研究所，邮编：100101），杂交瘤细胞株c1的保藏编号为cgmcc no.45726，实验菌株号为(a-8)-2a6-d1-b6-c3，其可稳定分泌红细胞抗体a。
4、进一步，所述杂交瘤细胞株c1为通过血型抗原三糖类似物蛋白偶联物免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合得到。
5、红细胞抗体a，所述红细胞抗体a为抗血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物的单克隆抗体，其由保藏编号cgmcc no.45726的杂交瘤细胞株分泌产生。
6、进一步，所述血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物为血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白的偶联物，所述血型抗原三糖a类似物为a2型。
7、进一步，所述血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白的偶联比值为a2：klh=40:1。
8、红细胞抗体a的制备方法，包括以下步骤：
9、步骤1：将血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物和等体积的弗式完全佐剂/弗式不完全佐剂混合，然后注入小鼠体内。
10、步骤2：在首次免疫后第7天采集小鼠尾静脉血，利用基于柱凝集法的抗体亲和力检测实验和中和实验来评价小鼠血清的效价，基于血清效价的评价结果调整免疫抗原的剂量。
11、步骤3：在小鼠血清效价末次评价后第21天，对选定需要进行融合的小鼠进行腹腔冲击免疫，冲击免疫剂量为末次免疫剂量的一半。
12、步骤4：收集经过步骤3冲击免疫后的小鼠脾细胞，将所述小鼠脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞进行融合制备出杂交瘤细胞，筛选出融合成功并稳定分泌目标单克隆抗体的杂交瘤细胞。
13、步骤5：将步骤4筛选出的杂交瘤细胞进一步注射到小鼠腹腔以腹水瘤的形式增殖，得到含有所述红细胞抗体a的腹水。
14、进一步，所述步骤4中小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的比例为1:2~1:10。
15、进一步，收集步骤5中的小鼠腹水，采用protein a – sephaorse 4b亲和层析法进行抗体纯化。
16、上述红细胞抗体a在制备红细胞抗原检测试剂盒中的应用。
17、进一步，所述红细胞抗原检测试剂盒包括柱凝集试剂盒，所述柱凝集试剂盒中包含abo血型正定型检测卡或abo血型反定型检测卡。
18、有益技术效果
19、1）本专利技术通过制备杂交瘤的方式，得到一株新型红细胞抗体a。该新型红细胞抗体a与其同类抗体相比，在小鼠血清中产生的浓度较高，但亲和力和特异性最强。
20、2）本专利技术方法制备得到的红细胞抗体a可直接用于检测人红细胞，准确度高。相较于其他商业单克隆抗体，在稀释数倍以后，依然可以检测到人红细胞，灵敏度高。
21、3）本专利技术抗体可以进行冻存保存，相较于其他商业化单克隆抗体需要在2-8℃的条件下进行保存和冷链运输，大大降低了成本。
22、4）本专利技术制备的杂交瘤细胞是通过用血型抗原三糖a蛋白偶联物（人工合成抗原）作为免疫源免疫小鼠得到，该人工合成抗原制备工艺先进可控，因此可以保证制备得到的杂交瘤细胞稳定且实现量产，能够推广到工业化生产和应用当中。
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1.分泌特异性红细胞抗体A的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为C1，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为CGMCC No.45726。
2.如权利要求1所述的分泌特异性红细胞抗体A的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株C1为通过血型抗原三糖类似物蛋白偶联物免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合得到。
3.红细胞抗体A，其特征在于，所述红细胞抗体A为抗血型抗原三糖A类似物蛋白偶联物的单克隆抗体，所述红细胞抗体A由保藏编号CGMCC No.45726的杂交瘤细胞株分泌产生。
4.如权利要求3所述的红细胞抗体A，其特征在于，所述血型抗原三糖A类似物蛋白偶联物为血型抗原三糖A类似物与血蓝蛋白的偶联物，所述血型抗原三糖A类似物为A2型，化学式如下：
5.如权利要求4所述的红细胞抗体A，其特征在于，所述血型抗原三糖A类似物与血蓝蛋白的偶联比值为A2：KLH=40:1。
6.权利要求3-5任一项所述的红细胞抗体A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，收集步骤5中的小鼠腹水，采用Protein A –Sephaorse 4B亲和层析法进行抗体纯化。
9.权利要求3所述的红细胞抗体A在制备红细胞抗原检测试剂盒中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述红细胞抗原检测试剂盒包括柱凝集试剂盒，所述柱凝集试剂盒中包含ABO血型正定型检测卡或ABO血型反定型检测卡。
...【技术特征摘要】
1.分泌特异性红细胞抗体a的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为c1，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为cgmcc no.45726。
2.如权利要求1所述的分泌特异性红细胞抗体a的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株c1为通过血型抗原三糖类似物蛋白偶联物免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合得到。
3.红细胞抗体a，其特征在于，所述红细胞抗体a为抗血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物的单克隆抗体，所述红细胞抗体a由保藏编号cgmcc no.45726的杂交瘤细胞株分泌产生。
4.如权利要求3所述的红细胞抗体a，其特征在于，所述血型抗原三糖a类似物蛋白偶联物为血型抗原三糖a类似物与血蓝蛋白的偶联物，所述血型抗原三糖a类似物为a2型，化学式如下：
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【专利技术属性】
技术研发人员：庞伟，王思博，魏立巧，娄彦坤，康青，黄志刚，王伟权，王秀柱，王丽，郝进学，
申请(专利权)人：天津德祥生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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