本发明专利技术涉及使用ｓｉＲＮＡ通过将转染复合物与一种或多种细胞相接触而转染细胞的方法，其中所述转染复合物包括转运聚合物和ｓｉＲＮＡ。所述转运聚合物可以包括例如Ｈ↑［３］Ｋ８ｂ和／或结构上类似的化合物。本发明专利技术还涉及这样的转染复合物，以及含有这样的转染复合物的组合物。本发明专利技术进一步涉及使用本发明专利技术的转染复合物治疗患者的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用siRNA通过将转染复合物与一种或多种细胞相接触而转染细胞的方法。本专利技术还涉及所述转染复合物及其组合物。本专利技术进一步涉及使用本专利技术的转染复合物及其组合物治疗患者的方法。
技术介绍
小干扰RNA分子(siRNA)的使用是使基因沉默并由此使相应的基因产物沉默的有效新技术。已经报道，RNA干扰(RNAi)比反义RNA独自沉默基因的效率高十倍(Rocheleau CE等人，Wnt signaling and an APC-relatedgene specify endoderm in early C.elegans embryos.Cell 1997；90707-716.)。siRNA已经用于研究蛋白质在信号传导途径中的作用，并且已经表明这些分子可以用于治疗多种其中致病蛋白过量表达的疾病(Arenz C，SchepersU.，RNA interferencefrom an ancient mechanism to a state of the arttherapeutic application？Naturwissenschaften 2003；90345-359.；Coburn GA，Cullen BR.siRNAsa new wave of RNA-based therapeutics.J AntimicrobChemother 2003；51753-756.)。为避免由较长双链RNA诱导的非特异性的基因沉默，小干扰RNA(21-23个核苷酸的双链体)，已经被用作调节子来降解靶mRNA(Fire A，Xu S，Montgomery MK，Kostas SA，Driver SE，MelloCC.Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA inCaenorhabditis elegans.Nature 1998；391806-811.)。siRNA一旦进入细胞，即被掺入RNA诱导的沉默复合物(RISC) ——一种导致RNA双链解旋和链分离的蛋白质-RNA复合物。然后，反义RNA指导活化的RISC来使靶mRNA退火并裂解靶mRNA(Hammond SM，Bernstein E，Beach D，HarmonGJ.An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing inDrosophila cells.Nature 2000；404293-296；Reynolds A，Leake D，Boese Q，Scaringe S，Marshall WS，Khvorova A.Rational siRNA design for RNAinterference.Nat Biotechnol 2004；22326-330；Hammond SM，Boettcher S，Caudy AA，Kobayashi R，Harmon GJ.Argonaute2，a link between genetic andbiochemical analyses of RNAi.Science 2001；2931146-1150；Bernstein E，Caudy AA，Hammond SM，Harmon GJ.Role for a bidentate ribonuclease inthe initiation step of RNA interference.Nature 2001；409363-366.)。病毒和非病毒载体已经被用来携带siRNA至它们的细胞溶质的mRNA靶(Simeoni F，Morris MC，Heitz F，Divita G.Insight into themechanism of the peptide-based gene delivery system MPGimplications fordelivery of siRNA into mammalian cells.Nucleic Acids Res2003；312717-2724.)。然而，迄今为止，少数肽载体已经被开发，其已经证明对siRNA高效递送至真核细胞(即，转染)是有效的。现有技术中存在对具有足以递送治疗有效量的siRNA进入靶细胞的转染率的药剂递药系统的需求。特别地，现有技术中存在对能够递送siRNA进入细胞内的改良的递药系统的需求。现有技术中还存在对在血清中稳定而使递药系统在体外和体内都有效的载体的需求。专利技术概述本专利技术涉及用siRNA转染细胞的方法。特别地，所述方法包括将转染复合物与一种或多种细胞接触，其中所述转染复合物包括转运聚合物和siRNA。所述转运聚合物包括组氨酸和赖氨酸。转运聚合物的例子包括但不限于H3K8b、H3K8b(+RGD)和结构上类似的类似物，具有八个末端分支和组氨酸富集的结构域，特别是那些约与H3K8b同样大小或比H3K8b小一些的聚合物。根据某些实施方案，细胞可以选自转化细胞系、重组细胞系、恶性细胞系或原代细胞系。本专利技术的方法还可以包括形成转染复合物。所述方法可以进一步包括在将所述转染复合物与细胞接触之前使转染复合物在约室温下静置约15分钟至约1个半小时。本专利技术进一步涉及包括siRNA和包括H3K8b或其结构类似物的转运聚合物的转染复合物。本专利技术进一步涉及包括这样的转染复合物的组合物。附图简述本专利技术通过参考附图中所描述的其实施方案而更加容易被理解，其中附图说明图1HK聚合物的图式结构。图1描述了这里所讨论的HK聚合物的图式结构，包括本专利技术的某些HK聚合物，如H3K8b。在图中，由实线连接的3个实心环代表各个聚合物的三赖氨酸核心。虚线分开聚合物中重要的结构域或基团。在高分支聚合物H3K8b中，从赖氨酸核心向外，顺序如下(1)4个组氨酸富集的结构域(H8HHHHNHHHH)；(2)4个赖氨酸(由K表示)；和(3)由R表示的8个末端HK分支。在较少分支的聚合物(H3K4b、H2K4b和HK4b)中，存在4个从三赖氨酸核心发出的末端HK分支。贯穿本申请，术语“H3K8b”指图1中所描述的结构，不含整合素(integrin)配基RGD。类似地，术语“H3K8b(-RGD)”指不含RGD的结构。图2H3K8b是有效的siRNA载体。图2是描述β-半乳糖苷酶siRNA的几种可能的载体(Lipofectamine、DOTAP、H3K8b、H3K4b、H2K4b和HK4b)抑制SVR-bag4细胞中β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的能力的效率的条线图，为它们抑制SVR-bag4细胞中β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的能力。H3K8b是最有效的载体，降低了80％的表达。在只有4个末端分支的聚合物(即HK4b、H2K4b和H3K4b)中，聚合物H3K4b是最有效的siRNA载体。数据表示三次实验的平均值±标准偏差(S.D.)。P＜0.001，对照vs.H3K8b或H3K4b；**，P＜0.05，对照vs.Lipofectamine、H2K4b或HK4b(多重比较vs.对照组(Bonferroni t检验))。图3H3K8b(+RGD)与β-半乳糖苷本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种使用ｓｉＲＮＡ转染细胞的方法，其包括 将转染复合物与一种或多种细胞相接触； 其中所述转染复合物包括转运聚合物和ｓｉＲＮＡ，且 其中所述转运聚合物包括组氨酸和赖氨酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿奇博尔德米克森，
申请(专利权)人：巴尔的摩，马里兰大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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