微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法技术

技术编号：40125539 阅读：12 留言：0更新日期：2024-01-23 21:19

本发明专利技术提供了微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，包括：称取样品置于试管中，依次加入硅胶珠和/或不锈钢珠、5％硫酸甲醇溶液、BHT和C17:0，激烈震荡10～15min，将试管密封后超声处理5～10min；将试管转移至水浴锅中，80～90℃水浴加热1～1.5h；将试管冷却至室温后，加入9％NaCl溶液和正己烷，充分混匀后，低速离心，得到分层溶液；取上清转移至离心管，抽滤挥干溶剂，再加入乙酸乙酯重新溶解，完成样品制备，采用气质联用上机检测。本发明专利技术能够将微量、稀缺样品中脂肪酸各组分充分提取，脂肪酸各组分含量准确；实验过程安全、减少了有机溶剂的使用量、节约了提取时间，加快了样品制备。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于脂肪酸检测，涉及微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法。

技术介绍

1、脂肪酸是由碳、氢、氧三种元素组成的一类化合物，是油脂的重要组成成分，3个脂肪酸与一个甘油酯化结合成油脂。脂肪酸的种类有很多种，有饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、短碳链脂肪酸，中碳链脂肪酸、长碳链脂肪酸。脂肪酸在生物体中以游离方式存在的只有微量，它们使大多数脂类具有不溶于水的性质，并可通过化学的或酶的水解作用，从它们中释放出来。

2、目前实验室脂肪酸提取方法主要采用溶剂浸提法，而溶剂浸提法耗时长，所需样品、溶剂质量较大，成本高，提取过程危险，提取产物溶剂残留含量高。且无法应用于实验室中微量、稀缺样品的脂肪酸组分的提取。

技术实现思路

1、针对上述问题，本专利技术的目的在于提供微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，实验过程安全、减少了有机溶剂的使用量、节约了提取时间，加快了样品制备。

2、本专利技术为实现技术目的采用的方案为：

3、微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，包括：

4、(1)称取样品置于试管中，依次加入硅胶珠和/或不锈钢珠、5％硫酸甲醇溶液、bht和c17:0，激烈震荡10～15min，将试管密封后超声处理5～10min；

5、(2)将试管转移至水浴锅中，80～90℃水浴加热1～1.5h；

6、(3)将试管冷却至室温后，加入9％nacl溶液和正己烷，充分混匀后，低速离心，得到分层溶液；

7、(4)取上清转移至离心管，抽滤

8、采用气质联用上机检测。

9、优选地，步骤(1)中，所述样品与5％硫酸甲醇溶液的质量体积比为(5～25)mg：1ml。

10、优选地，步骤(1)中，所述样品与bht和c17:0的质量比为(20～100)：40：1。

11、优选地，步骤(1)中，所述硅胶珠采用1mm硅胶珠；所述不锈钢珠采用2mm不锈钢珠。硅胶珠和/或不锈钢珠的加入是为了增大样品摩擦力加速样品破碎，其中不锈钢珠虽然会与硫酸甲醇发生化学反应，但对提取产物无显著影响，通常可以在硅胶珠中加入几粒不锈钢珠(硅胶珠多、不锈钢珠少)。

12、更优选地，所述样品的质量与硅胶珠和/或不锈钢珠粒数的比为(2～10)mg：(3～4)粒。

13、优选地，步骤(1)中，超声处理条件为：超声频率30～40khz、超声功率180w、温度30～60℃。

14、优选地，步骤(2)中，水浴加热过程中每隔30min振荡混匀。

15、优选地，步骤(3)中加入的正己烷的体积和步骤(1)中加入的5％硫酸甲醇溶液的体积相同；和/或低速离心的转速为6000～8000rpm/min。

16、更优选地，加入的9％nacl溶液和正己烷的体积比为3：20。

17、优选地，步骤(4)中，所述乙酸乙酯与上清的体积比为1：1。

18、本专利技术的有益效果在于：

19、本专利技术能够将微量、稀缺样品(酵母菌菌体、转基因拟南芥、烟草阳性苗种子等)中脂肪酸各组分充分提取，脂肪酸各组分含量准确；实验过程安全指数显著提升；减少了有机溶剂的使用量，节约了实验材料；节约了提取时间，提取时间缩短为2h，加快了样品制备；更加有利于实验室中实验的开展，加快了实验进度。

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【技术保护点】

1.微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，包括：

2.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品与5％硫酸甲醇溶液的质量体积比为(5～25)mg：1mL。

3.根据权利要求1或2所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品与BHT和C17:0的质量比为(20～100)：40：1。

4.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述硅胶珠采用1mm硅胶珠；所述不锈钢珠采用2mm不锈钢珠。

5.根据权利要求4所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，所述样品的质量与硅胶珠和/或不锈钢珠粒数的比为(2～10)mg：(3～4)粒。

6.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，超声处理条件为：超声频率30～40KHz、超声功率180W、温度30～60℃。

7.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(2)中，水浴加热过程中每隔30min振荡混匀。

8.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(3)中加入的正己烷的体积和步骤(1)中加入的5％硫酸甲醇溶液的体积相同；和/或低速离心的转速为6000～8000rpm/min。

9.根据权利要求1或8所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，加入的9％NaCl溶液和正己烷的体积比为3：20。

10.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(4)中，所述乙酸乙酯与上清的体积比为1：1。

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【技术特征摘要】

1.微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，包括：

2.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品与5％硫酸甲醇溶液的质量体积比为(5～25)mg：1ml。

3.根据权利要求1或2所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品与bht和c17:0的质量比为(20～100)：40：1。

4.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述硅胶珠采用1mm硅胶珠；所述不锈钢珠采用2mm不锈钢珠。

5.根据权利要求4所述的微量样品油脂脂肪酸组分提取检测方法，其特征在于，所述样品的质量与硅胶珠和/或不锈钢珠粒数的比为(2～10)mg：(3～4)粒。

6.根据权利要求1所述的微量样品油脂脂肪...

【专利技术属性】
技术研发人员：钮俊，傅钇钧，王佳，欧琼键，游慧燕，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：

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