【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及山香科科(teucrium montanum l.)提取物在促进t细胞增殖和分化中的应用。
技术介绍
1、山香科科(teucrium montanum l.)是一种多年生灌木状植物，具有半木质分枝，高达25厘米，栖息在欧洲的嗜热钙质岩石，干燥的山地草甸和森林边缘，从5月到夏末开花。长期以来，它被用于制成草药和营养品来食用。在传统医学中，被广泛用作利尿剂，镇痛剂和抗痉挛剂，用于治疗消化和呼吸系统疾病，并具有抗菌，抗真菌，抗炎和抗氧化活性。
2、cd8+t细胞保护性免疫是由效应细胞和记忆细胞组成的。效应细胞是消耗性群体，而记忆细胞确保再次遭遇相同抗原时能发生快速和强烈的免疫应答。抗原刺激促使初始t细胞增殖和分化，导致效应和记忆前体细胞库的生成，两个前体细胞库可以同时产生。在cd8+t细胞应答反应达到峰值之前，记忆前体细胞可以出现cd62l的表达，小部分早期效应细胞也可以分化成记忆细胞同时cd62l表达上调。近期研究证实大多数记忆细胞可能经历早期和晚期效应阶段，并且不对称细胞分裂导致记忆潜能的增加。
3、效应和记忆分化是由相互竞争的转录因子进行转录调控的，例如t-bet，blimp1，id2，stat4产生效应表型，而eomes，bcl6，tcf1和stat3促进获得记忆特性。该过程主要涉及pi3k/akt/mtor和ampk/foxo信号通路，其中foxo1是通过促进eomes和抑制t-bet表达来产生记忆t细胞的关键转录因子，而通过β-catenin激活tcf1有助于eomes的
4、本专利技术所述山香科科提取物能够促进淋巴细胞增殖，探讨了其调节t细胞向中央记忆细胞分化的作用机制。通过天然药物调节转录因子表达，促进中央记忆细胞形成。将为调控细胞分化功能候选药物开发提供一定的思路和实验依据。在疫苗、细胞防治肿瘤和感染疾病方面具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种山香科科提取物在促进t细胞增殖和向记忆细胞分化中的应用。
2、山香科科提取物，由以下方法制得：
3、将山香科科植物地上部分经干燥粉碎后，与95％乙醇按体积比为1:8～15的比例混合，加热回流提取3次，每次3小时，得到山香科科提取液。
4、将上述提取液减压浓缩得到总提物浸膏，再溶于甲醇中，按重量比1:2的比例加入100-300目硅胶，搅拌均匀，挥干溶剂后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇进行索氏回流提取，分别得到山香科科的石油醚提取物iva-pe、二氯甲烷提取物iva-dm、乙酸乙酯提取物iva-ea、甲醇提取物iva-mt。
5、对提取物iva-dm采用硅胶柱色谱分离，依次以体积比为10:1、8:1、6:1、5:1、3:1和2:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，其中5:1的石油醚-丙酮洗脱得到组份iva-d，3:1的石油醚-丙酮洗脱得到组份iva-e。
6、对组份iva-d采用mci树脂柱色谱分离，分别40％甲醇-水、60％甲醇-水、80％甲醇-水、100％甲醇-水和丙酮依次洗脱，其中100％甲醇-水洗脱得到6个组份iva-d8～iva-d13。
7、采用同样的方法，对组份iva-e经mci树脂柱色谱分离，分别40％甲醇-水、60％甲醇-水、80％甲醇-水、100％甲醇-水和丙酮依次洗脱，其中100％甲醇-水洗脱得到3个组份iva-e11～iva-e13。
8、本专利技术筛选具有能够促进t细胞增殖和向中央记忆细胞分化的一系列山香科科提取物包括iva-dm及其活性组份。
9、采用alarmblue法检测所述山香科科提取物iva-dm及其组份对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响；cfse标记小鼠脾淋巴细胞，流式细胞术测定山香科科提取物iva-dm对cd8+t细胞增殖的影响。经上述药效学实验证明所述山香科科物iva-dm及其组份能够促进淋巴细胞增殖，包括促进cd8+t细胞增殖。
10、采用流式细胞术测定所述山香科科提取物iva-dm组份iva-d13和iva-e13对在t细胞激活剂作用下的cd8+t细胞分化表型分子的影响。实验结果表明，在t细胞激活剂作用下，所述山香科科提取物iva-dm组份iva-d13和iva-e13可以促进cd44+cd62l+cd8+中央记忆细胞形成。
11、所述山香科科提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13在制备淋巴细胞诱导增殖试剂中的应用。
12、所述山香科科提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13在制备淋巴细胞诱导分化试剂中的应用。
13、所述山香科科提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13在细胞制品中的应用。
14、所述山香科科提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13在疫苗制品中的应用。
15、所述细胞制品为体外诱导且具有肿瘤和感染疾病防治功效。
16、所述疫苗制品为体内诱导且具有肿瘤和感染疾病防治功效。
17、所述肿瘤为白血病，淋巴癌，肺癌，肝癌、乳腺癌、结肠癌。
18、所述感染疾病为肺炎、肠炎、肝炎、脑炎。
19、本专利技术的有益效果在于：
20、(1)本专利技术制备的山香科科提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13可以促进淋巴细胞增殖，包括促进cd8+t细胞增殖，有促进免疫功能的作用。
21、(2)山香科科提取物iva-dm组份iva-d13和iva-e13可以诱导t细胞向中央记忆细胞分化，有调节t细胞分化的作用。
22、为所述山香科科提取物进一步开发和利用提供了有效的理论支持和科学依据。
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1.一种山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物为山香科科植物地上部分提取物IVA-DM及其组份IVA-D13和IVA-E13。
2.根据权利要求1所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，提取物IVA-DM及其组份IVA-D13和IVA-E13的制备方法为：
3.根据权利要求1-2任一项所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，所述提取物IVA-DM，IVA-D13或IVA-E13能够促进淋巴细胞增殖。
4.根据权利要求1-2任一项所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，所述提取物IVA-D13或IVA-E13能够在T细胞激活剂作用下促进淋巴细胞向中央记忆细胞分化。
5.根据权利要求3所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，IVA-DM，IVA-D13或IVA-E13能促使CFSE标记的细胞显示荧光强
6.根据权利要求4所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物，其特征在于，所述提取物IVA-D13或IVA-E13能够上调细胞表面CD62L和CD44的表达。
7.权利要求1所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物在制备淋巴细胞诱导增殖试剂中的应用。
8.权利要求1所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物在制备淋巴细胞诱导分化试剂中的应用。
9.权利要求7和8所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物在制备细胞制品中的应用。
10.权利要求7和8所述山香科科(Teucrium montanum L.)提取物在制备疫苗制品中的应用。
11.根据权利要求9所述应用，所述细胞制品为体外诱导且具有肿瘤和感染疾病防治功效。
12.根据权利要求10所述应用，所述疫苗制品为体内诱导且具有肿瘤和感染疾病防治功效。
13.根据权利要求9和10所述应用，所述肿瘤为白血病，淋巴癌，肺癌，肝癌、乳腺癌、结肠癌。
14.根据权利要求9和10所述应用，所述感染疾病为肺炎、肠炎、肝炎、脑炎。
...【技术特征摘要】
1.一种山香科科(teucrium montanum l.)提取物，其特征在于，所述山香科科(teucrium montanum l.)提取物为山香科科植物地上部分提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13。
2.根据权利要求1所述山香科科(teucrium montanum l.)提取物，其特征在于，提取物iva-dm及其组份iva-d13和iva-e13的制备方法为：
3.根据权利要求1-2任一项所述山香科科(teucrium montanum l.)提取物，其特征在于，所述提取物iva-dm，iva-d13或iva-e13能够促进淋巴细胞增殖。
4.根据权利要求1-2任一项所述山香科科(teucrium montanum l.)提取物，其特征在于，所述提取物iva-d13或iva-e13能够在t细胞激活剂作用下促进淋巴细胞向中央记忆细胞分化。
5.根据权利要求3所述山香科科(teucrium montanum l.)提取物，其特征在于，iva-dm，iva-d13或iva-e13能促使cfse标记的细胞显示荧光强度逐级递减。
6.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员：竺青，马双刚，庾石山，李婧，张灵芝，刘云宝，李勇，李明燕，高长醒，
申请(专利权)人：中国医学科学院药物研究所，
类型：发明
国别省市：
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