【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生命科学，具体涉及一种动物肌肉组织的病理切片制作方法。
技术介绍
1、在评估注射剂临床前安全性评价中，通常选用实验动物兔的股四头肌，作为评价肌肉损伤的实验系统，进行药物注射剂对肌肉组织刺激性的评估。在注射结束后，剖检动物肌肉组织，对肌肉组织进行组织病理学检查。组织病理学检查作为评价注射液肌肉刺激性反应、药物安全性评价中的关键指标，其作用至关重要。
2、传统的病理制片方法为酒精梯度脱水，肌肉组织经过70％、80％、90％、95％、100％乙醇逐级梯度脱水，通常是在脱水机中进行，在梯度脱水过程中完成脱脂，但是在此过程中存在一些问题：如传统方式梯度酒精置于脱水机内，脂类组织被脱出，容易堵塞脱水机管路；传统过程的酒精梯度无法确定脱脂的程度，无法确保肌肉中脂质组织完全去除，因此肌肉中会残留脂质成分；由于肌肉组织其特性为质地较韧，肌肉组织中含有脂质成分，两种成分质地不同，给切片制作增加困难，容易出现肌肉组织薄厚不均，容易脱片，容易出现肌肉间空间较大，容易叠片等人工假象，可导致病理诊断造成困难，出现误诊的情况。
3、传统的病理制片方法并不容易制备出质量较好的肌肉病理切片，因为兔肌肉组织中脂肪成分含量低、筋膜含量较少，肌肉间间质成分占比较少，同时每条肌丝互相贴合，但又相对独立，所以从组织固定到切片制作完成这个过程中存在很多不确定性，如取材、脱水、包埋、切片及染色的不同，均会造成肌肉组织的固定不彻底、切片过厚、切片碎裂、染色质量较低等情况。上述情况对组织病理学诊断造成较严重的影响，可出现误导判断，错误判断的问
技术实现思路
1、本专利技术的目的是，提供一种肌肉组织病理切片制作方法。本专利技术参考微波对组织的渗透作用，通过反复试验和条件的摸索，增加微波脱脂操作进行组织标本制备，所制备的标本固定完好，肌肉切片平整，染色均匀，有利于病理诊断的进行。
2、本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
3、本专利技术提供一种动物肌肉组织病理切片的制作方法，包括以下步骤：
4、s1、取材处理：剖取动物肌肉组织样本，沿肌肉肌丝方向剖开肌肉组织，使用生理盐水冲洗除去血污；
5、s2、固定处理：将步骤s1冲洗后的肌肉组织样本浸泡于浓度为10wt％中性甲醛溶液中固定24～48小时，所述中性甲醛溶液的体积是所述肌肉组织样本体积的5倍以上；
6、s3、脱脂处理：将步骤s2固定后的肌肉组织样本，在波长为10cm～15cm的微波条件下，使用80％乙醇溶液作为脱脂液，对肌肉组织进行脱脂，每1～3小时更换一次肌肉组织样本中的脱脂液，所述肌肉组织样本中的脱脂液无色清澈即为脱脂结束；
7、s4、脱色透明：在步骤s3脱脂处理结束后，将肌肉组织样本用无水乙醇脱水5～9次，每0.5～3小时更换一次无水乙醇溶液；然后，将脱色后的肌肉组织样本用二甲苯透明2～4次，每0.5～3小时更换一次二甲苯；
8、s5、浸蜡包埋：将步骤s4脱水透明后的肌肉组织样本，在62～68℃条件下用液体石蜡浸蜡处理1～3次，每1～2小时更换一次液体石蜡，处理后进行包埋得到石蜡病理样本；
9、s6、病理切片、染色处理：将步骤s5得到的石蜡病理样本进行切片处理，最终进行病理染色。
10、作为优选实施方案，所述步骤s2还包括以下步骤：在所述固定处理完成后，沿所述剖开的剖开面40～60°切取剖开面，得到肌肉组织样本块，将所述样本块置于包埋框中进行流水冲洗3～6小时，所述流水冲洗是将含有肌肉组织样本块的包埋框置于容器中，容器口罩上纱布并用线系牢，用橡皮管将自来水引流至容器内，让水自下而上的溢出，实现冲洗作用，容器可以是烧杯或广口瓶。
11、作为优选实施方案，在所述包埋框内的肌肉组织样本块上下设置有海绵。
12、作为优选实施方案，所述动物肌肉组织包括兔的股四头肌肉组织。
13、作为优选实施方案，所述步骤s2中的固定处理过程置于37℃摇床内进行，所述固定时间为24小时。
14、作为优选实施方案，所述步骤s3，将固定后的肌肉组织样本，在波长为12.25cm的微波条件下，使用80％乙醇溶液作为脱脂液，对肌肉组织进行脱脂，每2小时更换一次肌肉组织样本中的脱脂液，更换脱脂液的次数不少于3次。
15、作为优选实施方案，所述步骤s4，将脱脂处理后的肌肉组织样本用无水乙醇脱水7次，每1～2小时更换一次无水乙醇；然后，将脱色后的肌肉组织样本用二甲苯透明3次，每1～2小时更换一次二甲苯。
16、作为优选实施方案，所述步骤s5，将脱水透明后的肌肉组织样本，在65℃条件下用液体石蜡浸蜡处理2次，每1小时更换一次液体石蜡，处理后进行包埋得到石蜡病理样本。
17、作为优选实施方案，所述步骤s6中的切片处理包括对石蜡病理样本进行切片、摊片和烤片操作，所述切片的厚度为2～5μm，所述摊片的温度为45～50℃，所述烤片的温度为45～50℃。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
19、本专利技术提供的肌肉组织病理制片方法，相对与传统标本组织标本制作，本专利技术增加了微波脱脂过程，确保脂类物质的脱离，保证脱水效果，优化了整个病理切片制备的处理方式，确保动物肌肉组织制备切片的厚度均匀，保证染色后切片的形态结构、颜色均匀良好，使得制成的动物肌肉组织切片结构更加完整，平整，干净无褶皱，无脱片现象，品质更高，可观察性更优，符合病理诊断要求。
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1.一种动物肌肉组织病理切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S2还包括以下步骤：在所述固定处理完成后，沿所述剖开的剖开面40～60°切取剖开面，得到肌肉组织样本块，将所述样本块置于包埋框中进行流水冲洗3～6小时。
3.根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于，在所述包埋框内的肌肉组织样本块上下设置有海绵。
4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述动物肌肉组织包括兔的股四头肌肉组织。
5.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S2中的固定处理过程置于37℃摇床内进行，所述固定时间为24小时。
6.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S3，将固定后的肌肉组织样本，在波长为12.25cm的微波条件下，使用80％乙醇溶液作为脱脂液，对肌肉组织进行脱脂，每2小时更换一次肌肉组织样本中的脱脂液，更换脱脂液的次数不少于3次。
7.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S4，将脱脂处理后的肌肉组织样本用无水乙醇脱水7
8.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S5，将脱水透明后的肌肉组织样本，在65℃条件下用液体石蜡浸蜡处理2次，每1小时更换一次液体石蜡，处理后进行包埋得到石蜡病理样本。
9.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤S6中的切片处理包括对石蜡病理样本进行切片、摊片和烤片操作，所述切片的厚度为2～5μm，所述摊片的温度为45～50℃，所述烤片的温度为45～50℃。
10.根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于，所述流水冲洗是将含有肌肉组织样本块的包埋框置于容器中，容器口罩上纱布并用线系牢，用橡皮管将自来水引流至容器内，让水自下而上的溢出，实现冲洗作用。
...【技术特征摘要】
1.一种动物肌肉组织病理切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤s2还包括以下步骤：在所述固定处理完成后，沿所述剖开的剖开面40～60°切取剖开面，得到肌肉组织样本块，将所述样本块置于包埋框中进行流水冲洗3～6小时。
3.根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于，在所述包埋框内的肌肉组织样本块上下设置有海绵。
4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述动物肌肉组织包括兔的股四头肌肉组织。
5.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤s2中的固定处理过程置于37℃摇床内进行，所述固定时间为24小时。
6.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤s3，将固定后的肌肉组织样本，在波长为12.25cm的微波条件下，使用80％乙醇溶液作为脱脂液，对肌肉组织进行脱脂，每2小时更换一次肌肉组织样本中的脱脂液，更换脱脂液的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，杜海波，
申请(专利权)人：上海千崖尽至生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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