【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种经修饰的cas3移位酶，特别是涉及一种能够控制目标多核苷酸穿过生物纳米孔移动的dna移位酶，并且特别有助于对多核苷酸进行测序，属于基因工程和遗传工程领域。
技术介绍
1、近些年发展起来的纳米孔测序技术是一种新型的单分子测序技术，其利用电场力驱动单链多核苷酸穿过嵌在绝缘磷脂膜上的纳米级生物孔道蛋白，由于不同的碱基大小，每个核苷酸分子在通过生物纳米孔时会产生特征性的阻碍电流，记录下的这些特征电流信号对应于目标核酸的序列。
2、在“链测序”方法中，单个多核苷酸链通过所述生物纳米孔从而实现核苷酸序列的鉴定。相比于其他测序技术，这种测序技术的优势在于成本低，无需pcr扩增，快速实时便捷，测序读长长(超过150kb)，以及rna及表观遗传修饰直接测序的能力。其被认为是测序领域的革命性技术，具有不可估量的应用价值。
3、但是，纳米孔测序技术也存在严重的限制。在电场作用下，单链多核苷酸穿过纳米孔的速度非常快以至于难以从系统噪音中分辨出单个核苷酸的电流阻碍信号。因此，为了实现对核苷酸的鉴定，链测序使用多核苷酸结合...
【技术保护点】
1.一种修饰的Tfu Cas3移位酶，其特征在于，通过对其HD-核酸酶活性域中关键位点的氨基酸进行突变，使其丧失核酸酶活性，成为一种单纯的单链DNA移位酶。
2.根据权利要求1所述的移位酶，其中HD-核酸酶活性域中关键位点的氨基酸突变是D84A突变。
3.根据权利要求2所述的移位酶，所述的移位酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种修饰的Tfu Cas3移位酶，其特征在于，将Tfu Cas3移位酶中至少一个天然半胱氨酸残基突变为丙氨酸或者丝氨酸，所述Tfu Cas3移位酶保留其控制多核苷酸移动的能力。
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【技术特征摘要】
1.一种修饰的tfu cas3移位酶，其特征在于，通过对其hd-核酸酶活性域中关键位点的氨基酸进行突变，使其丧失核酸酶活性，成为一种单纯的单链dna移位酶。
2.根据权利要求1所述的移位酶，其中hd-核酸酶活性域中关键位点的氨基酸突变是d84a突变。
3.根据权利要求2所述的移位酶，所述的移位酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4.一种修饰的tfu cas3移位酶，其特征在于，将tfu cas3移位酶中至少一个天然半胱氨酸残基突变为丙氨酸或者丝氨酸，所述tfu cas3移位酶保留其控制多核苷酸移动的能力。
5.根据权利要求4所述的移位酶，其中突变组合包括c293s、c295s、c838s、c853s、c873s、c939s和d84a。
6.根据权利要求5所述的移位酶，所述的移位酶的氨基酸序列如seq id no.3所示。
7.一种修饰的tfu cas3移位酶，其特征在于，至少两个半胱氨酸残基或者非天然氨基酸被引入tfu cas3移位酶的ctd域、reca1域或reca2域中，所述tfu cas3移位酶保留其控制多核苷酸移动的能力。
8.根据权利要求7所述的移位酶，其中突变位点包括e921-t926、p938-f944、m870-i881、l849-f856、v592-q604、r622-r628、m373-l383和r331-a339。
9.根据权利要求8所述的移位酶，其中突变组合包括l376c、v877c、c293s、c295s、c838s、c853s、c873s、c939s和d84a。
10.根据权利要求9所述的移位酶，所述的移位酶的氨基酸序列如seq id no.5所示。
11.一种修饰的tfu cas3移位酶，其特征在于，用多核苷酸结合部分替换tfu cas3移位酶的hd-核酸酶活性域，所述tfu cas3移位酶保留其控制多核苷酸移动的能力。
12.根据权利要求11所述的移位酶，所述的多核苷酸结合部分包括一个或多个结构域。
13.根据权利要求12所述的移位酶，所述的结构域是从螺旋-发卡-螺旋(hhh)结构中选取的相应的结构域。
14.根据权利要求13所述的移位酶，所述的移位酶的氨基酸序列如seq id no.7所示。
15.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆志方，
申请(专利权)人：北京普译生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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