【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，具体为一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法。
技术介绍
1、青钱柳是我国特有的珍稀木本药用植物，主要以收获叶片为主，具有降“三高”、抗衰老、恢复胰岛功能等生理功能，其叶中主要的活性物质是黄酮类和三萜类，为了在不影响叶片收获量的情况下，实现快速提高叶片中次生代谢物的含量，然而现有的技术中还存在以下问题：
2、青钱柳中黄酮类和三萜类等次生代谢物的含量很低，然而，青钱柳的人工栽培中，施肥等管理措施虽然促进了生长，但会强烈抑制叶中次生代谢物的合成和积累，造成青钱柳药用价值的下降。
3、因此我们便提出了一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法能够很好的解决以上问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，以解决上述
技术介绍
提出的目前市场上青钱柳中黄酮类和三萜类等次生代谢物的含量很低，然而，青钱柳的人工栽培中，施肥等管理措施虽然促进了生长，但会强烈抑制叶中次生代谢物的合成和积累，造成青钱柳药用价值的下降的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，包括以下步骤：
3、s1、青钱柳的人工栽培：
4、s11、在野外找到呈集群分布的青钱柳居群，选取树龄60年以上且生长良好的大树；
5、s12、挖取浅层（0~30 cm）细根，用消毒的剪刀剪取细根，连同细根表面的根际土壤一起带回实验室；p>
6、s13、将细根剪为约1 cm长的根段，与根际土壤混合均匀作为混合天然菌根真菌接种菌剂；
7、s14、将天然菌根真菌接种菌剂在通风和无污染的地方自然风干，风干后的菌根真菌接种菌剂放置于-20℃的冰柜中保存；
8、s2、接种方法：
9、s21、于5月底至6月初对人工栽培的青钱柳植株进行接种；
10、s22、沿树干挖直径30~50 cm的圆形接种坑，深度以露出根系为准；
11、s23、然后将上述风干的菌根真菌接种菌剂均匀撒播与根系周边，每棵植株约100g接种剂，使苗根与菌剂充分接触；
12、s24、然后用土掩埋轻轻压实即可，接种一个月以后即可达到明显促进生长和次生代谢的作用；
13、s3、黄酮类化合物含量测定：
14、s31按常规方法于5月中旬开始对各试验单元中所有青钱柳植株的苗高和地径生长进行测定,最后计算各试验单元的平均树高和地径生长状况，以后每月中旬进行重复调查,直至生长基本停止的11月中旬；
15、s32、每月测定生长指标后,按照混合采样法从试验单元中的青钱柳植株中上部采集完全功能叶；6月中旬第1次采集,直至11月,共进行6次采样；采集的样品经去叶柄、烘干、磨碎后密封后保存在0~～4℃冷库；
16、s33、每个植物样品称取约2 g左右,用滤纸包好后放入250 ml索氏提取器并用石油醚在80 ℃水浴锅中回流提取4h,以去除叶样品中极性较小的脂溶性成分，丢弃提取液将药渣在室温下自然晾干,挥干后的药渣作为黄酮和三菇提取的样品，本试验采用超声波辅助提取法，用75%乙醇水溶液在65 ℃条件下超声提取45 min ,在同样条件下提取2次；
17、s34、总黄酮的测定参照 bao等所描述的优化后的比色法进行测定，精密吸取1 ml提取液置于10ml容量瓶,加入0. 3 ml 5%nano,溶液,在室温下放置5 min后加入0.3 ml 1%的aici,甲醇溶液,而后加入1 m naoh溶液混匀并在室温下显色15min ,最后在410 nm处测定吸光度。
18、优选的，所述提取液中总黄酮含量以芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，北京)为对照品进行计算(线性范围为:2.2 ~56.0ug/ml,r>0.99),最后以每克青钱柳叶干样品中含有相当于芦丁当量的毫克数表示。
19、优选的，所述接种天然菌根真菌接种菌剂后，3年生的青钱柳人工林植株的平均树高生长由1.54 m提高到1.76 m，增长了14.3%，平均胸径由1.66 cm提高到2.36 cm，增长了42.2%。
20、优选的，所述叶中总黄酮由20.2 mg/g提高到33.4 mg/g，增长了65.3%；叶中总三萜由28.4 mg/g提高到54.6 mg/g，增长了92.3%。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法：
22、（1）通过挖取浅层（0~30 cm）细根，用消毒的剪刀剪取细根，连同细根表面的根际土壤一起带回实验室，将细根剪为约1 cm长的根段，与根际土壤混合均匀作为混合天然菌根真菌接种菌剂，使用青钱柳天然菌根真菌接种菌剂的制备和接种方法简单易行，成本低，可协同提高青钱柳的生长和次生代谢，克服了传统栽培中要提高次生代谢含量必须限制生长的弊端，以野生青钱柳大树浅层的细根的根段和根际土壤的混合物作为天然菌根真菌接种剂，对人工栽培的青钱柳植株进行接种可达到同时提高青钱柳植株生长和次生代谢物积累的目的；
23、（2）通过将天然菌根真菌接种菌剂在通风和无污染的地方自然风干，风干后的菌根真菌接种菌剂放置于-20℃的冰柜中保存，严树干挖直径30~50 cm的圆形接种坑，深度以露出根系为准，然后将上述风干的菌根真菌接种菌剂均匀撒播与根系周边，每棵植株约100g接种剂，使苗根与菌剂充分接触，然后用土掩埋轻轻压实即可，接种一个月以后即可达到明显促进生长和次生代谢的作用，与施肥和喷施化学药剂相比，采用内生真菌接种来提高植物次生代谢对环境安全无污染。
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1.一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述提取液中总黄酮含量以芦丁标准品（中国药品生物制品检定所，北京）为对照品进行计算（线性范围为：2.2 ~56.0 ug/mL，R > 0.99），最后以每克青钱柳叶干样品中含有相当于芦丁当量的毫克数表示。
3.根据权利要求1所述的一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述接种天然菌根真菌接种菌剂后，3年生的青钱柳人工林植株的平均树高生长由1.54 m提高到1.76 m，增长了14.3%，平均胸径由1.66 cm提高到2.36 cm，增长了42.2%。
4.根据权利要求1所述的一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述叶中总黄酮由20.2 mg/g提高到33.4 mg/g，增长了65.3%；叶中总三萜由28.4mg/g提高到54.6 mg/g，增长了92.3%。
【技术特征摘要】
1.一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种提高人工栽培青钱柳叶中次生代谢物含量的方法，其特征在于：所述提取液中总黄酮含量以芦丁标准品（中国药品生物制品检定所，北京）为对照品进行计算（线性范围为：2.2 ~56.0 ug/ml，r > 0.99），最后以每克青钱柳叶干样品中含有相当于芦丁当量的毫克数表示。
3.根据权利要求1所述的一种提高人工栽培青钱柳叶中次生...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓波，赵婷婷，邓逸敏，张梦佳，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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