一种鸡X期胎盘原始生殖细胞分离与建系的方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡X期胎盘原始生殖细胞分离与建系的方法，属于细胞培养领域。该方法包括使用带孔滤纸膜从X期鸡胚的胚盘中分离、纯化获取原始生殖细胞；将所述原始生殖细胞置于体外长期培养液中，利用饲养层共培养的方法进行培养，实现扩增建系。本发明专利技术通过所构建的X期原始生殖细胞的体外增殖和免疫细胞学特征，发现X期原始生殖细胞可以显著迁移到胚胎性腺并高效获得供体来源的后代，这表明X期原始生殖细胞已经具备其他阶段原始生殖细胞具有的功能和特征。本发明专利技术为家禽早期原始生殖细胞发育生物学研究提供参考，为后续制备基因编辑鸡和保护家禽种质资源提供新策略。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞培养领域，特别是涉及一种鸡x期胎盘原始生殖细胞分离与建系的方法。

技术介绍

1、原始生殖细胞(primordial germ cells,pgcs)是动物体内所有生殖细胞的祖细胞，具有自我更新能力，并能够分化为精子和卵母细胞，主要功能是将遗传信息传递到下一代，对于物种的延续至关重要。鸟类pgcs最先起源于eg&k x期胚胎的中央盘状明区(xpgcs)，随后pgcs跟随胚胎外胚层迁移到生殖新月，进一步发育侵入血管进入血液循环系统，最终迁移并定植在性腺。鸟类pgcs这种特殊的迁移途径，结合特定的分离培养方法，使得pgcs可以进行体外分离培养。根据胚胎发育过程中pgcs特定的迁移路线，可以从hh 5～8期胚胎的生殖新月、hh 14～17期的胚胎血液和hh 27～31期的胚胎性腺中分离出pgcs。x期胚胎内约有30个pgcs，生发新月形成时约有200～250个，hh 14～17期胚胎血液内约有380个，孵化7天后发育中的胚胎性腺中有1000多个。体外培养的pgcs成为了一种体外高效生产基因编辑动物的工具。在动物育种过程，pgcs可以用于特本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鸡X期胎盘原始生殖细胞分离与建系的方法，其特征在于，包括使用带孔滤纸膜从X期鸡胚的胚盘中分离、纯化获取原始生殖细胞；将所述原始生殖细胞置于体外长期培养液中，利用小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层共培养的方法进行培养，实现扩增建系。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述X期鸡胚来源于所收集的当天新鲜产下的受精种蛋。

3.如权利要求1所述的方法，所述带孔滤纸膜为内含小孔的正方形滤纸，边长为15mm，孔径为7mm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，分离所述X期原始生殖细胞的步骤包括：用带孔滤纸膜贴于X期鸡胚的胚盘顶部的卵黄膜，分离出所述胚盘...

【技术特征摘要】

1.一种鸡x期胎盘原始生殖细胞分离与建系的方法，其特征在于，包括使用带孔滤纸膜从x期鸡胚的胚盘中分离、纯化获取原始生殖细胞；将所述原始生殖细胞置于体外长期培养液中，利用小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层共培养的方法进行培养，实现扩增建系。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述x期鸡胚来源于所收集的当天新鲜产下的受精种蛋。

3.如权利要求1所述的方法，所述带孔滤纸膜为内含小孔的正方形滤纸，边长为15mm，孔径为7mm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，分离所述x期原始生殖细胞的步骤包括：用带孔滤纸膜贴于x期鸡胚的胚盘顶部的卵黄膜，分离出所述胚盘，并将所述胚盘转移至预热至37℃的pbs溶液中洗涤，重复洗涤2-3次，之后用所述体外长期培养液吹打，直至所述胚盘的组织成为细胞悬液，即得所述原始生殖细胞混合液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，纯化所述原始生殖细胞的步骤包括：将所述原始生殖细胞混合液转移到饲养层，在37℃、5％co2培养48h，收集未贴壁的悬浮细胞经离心后，用所述体外长期培养液重悬，之后转至新的饲养...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆阳清，支怡飞，陈东阳，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：