狂犬病毒中和抗体的酶联免疫检测试剂盒及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供了狂犬病毒中和抗体的酶联免疫试剂盒，包括狂犬病毒抗原包被的酶联反应板、酶标抗狂犬病病毒单克隆抗体、稀释液、显色试剂和阴性、阳性血清对照；其中所述狂犬病毒抗原为狂犬病毒G抗原，所述试剂盒通过竞争性ELISA计算阻断率来评价血清样品的抗体效价。本发明专利技术试剂盒中所使用的单克隆抗体高亲和力结合狂犬病毒G蛋白的不同抗原表位，并高亲和力中和来源于不同基因亚型的狂犬病病毒毒株，通过竞争性ELISA计算阻断率来评价血清样品的抗体效价，灵敏度和特异性均能媲美现有FAVN标准测定方法，基本上避免了假阳性和假阳性检测结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学，涉及抗狂犬病病毒的抗体，特别涉及一种狂犬病毒抗体中和抗体检测试剂盒制备方法及初步应用。

技术介绍

1、狂犬病病毒rabv为单股负链rna病毒，属于弹状病毒科(rhabdoviridae)狂犬病毒属(lyssavirus)。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链rna，是引起狂犬病的病原体。rabv容易为日光、紫外线、甲醛、升汞季胺类化合物(如新洁尔灭)、脂溶剂、75％酒精等灭活，其悬液经56℃灭活30-60分钟或100℃灭活2分钟，病毒即可灭活。病毒于-80℃或冻干后置0-4℃中可保持活力数年。rabv包含5种蛋白，即糖蛋白(g)、核蛋白(n)、双聚酶(l)、磷蛋白(ns)及基质(m)。糖蛋白g为主要的保护性抗原，可诱导机体产生中和抗体，对抗病毒攻击。

2、预防狂犬病可以通过规范的暴露前和暴露后处置来实现，接种狂犬病疫苗是重要的处置手段，疫苗免疫后测定血清内的狂犬病病毒中和抗体滴度水平可以评价疫苗接种是否达到保护性水平。who认为，血清中的有效结合狂犬病毒的中和抗体效价≥0.5国际单位(iu/ml)才具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种狂犬病毒中和抗体的酶联免疫检测试剂盒，包括狂犬病毒抗原包被的酶联反应板、酶标抗狂犬病病毒单克隆抗体、稀释液、显色试剂和阴性、阳性血清对照；其中所述狂犬病毒抗原为狂犬病毒G抗原，所述试剂盒通过竞争性ELISA计算阻断率来评价血清样品的抗体效价。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述稀释液选自100%正常犬血清、50%正常犬血清、20%正常犬血清、10%正常犬血清、5%正常犬血清、5%BSA的磷酸盐缓冲液或者5%脱脂乳。

3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述显色试剂为四甲基联苯胺溶液，所述终止液为硫酸或磷酸溶...

【技术特征摘要】

1.一种狂犬病毒中和抗体的酶联免疫检测试剂盒，包括狂犬病毒抗原包被的酶联反应板、酶标抗狂犬病病毒单克隆抗体、稀释液、显色试剂和阴性、阳性血清对照；其中所述狂犬病毒抗原为狂犬病毒g抗原，所述试剂盒通过竞争性elisa计算阻断率来评价血清样品的抗体效价。

2.根据权利要求1所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述稀释液选自100%正常犬血清、50%正常犬血清、20%正常犬血清、10%正常犬血清、5%正常犬血清、5%bsa的磷酸盐缓冲液或者5%脱脂乳。

3.根据权利要求1或2所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述显色试剂为四甲基联苯胺溶液，所述终止液为硫酸或磷酸溶液。

4.权利要求1-3任一项所述试剂盒的制备方法，其步骤包括：1）酶标抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备：取辣根过氧化物酶（hrp）溶液，加入hrp活化缓冲液和hrp偶联缓冲液进行活化后，加入需偶联的抗狂犬病病毒单克隆抗体，混匀后于4℃透析过夜；透析后加入还原剂完成偶联；2）抗原包被：用elisa包被液将狂犬病毒g蛋白于4℃包被过夜，弃去包被液；加入洗涤液进行洗涤...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛良鹏，吴梦，刘雪芹，丁玉春，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：