【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及鼠疫耶尔森菌ev76-δsorf17在制备鼠疫疫苗中的应用。
技术介绍
1、鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的自然疫源性人畜共患病，主要宿主是啮齿动物，可通过鼠蚤传染给人，并可通过气溶胶途径在人与人之间传播，其传染性强，病死率极高，也是最具威胁的生物战剂和生物恐怖剂之一。
2、疫苗接种是预防鼠疫最为有效且经济的方法，其中鼠疫减毒活疫苗已经有70多年的应用历史，具有一定的保护性。ev76疫苗株在部分国家和地区被用在高危人群中，它是基于染色体上pgm位点缺失的减毒株，能够诱导机体的体液免疫和细胞免疫应答，对腺鼠疫和肺鼠疫能够起到保护作用。
3、但是鼠疫ev76减毒活疫苗可引起不同程度的副作用。此外有其他pgm位点缺失减毒株感染造成实验人员死亡的个案报道。所以制备安全性更好的鼠疫减毒活疫苗非常必要。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是如何降低ev76疫苗株的毒力，以提高ev76疫苗株的安全性。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种预防和/或治疗鼠疫的产品。
3、本专利技术提供的预防和/或治疗鼠疫的产品的活性成分为sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的ev76菌株。
4、为了解决上述技术问题，本专利技术又提供了一种重组鼠疫耶尔森菌。
5、本专利技术提供的重组鼠疫耶尔森菌为sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的ev76菌株。
6、上述产品或重组鼠疫耶尔森菌中，所述
7、a1)氨基酸序列是序列1所示的蛋白质；
8、a2)将序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；
9、a3)与序列1所示的氨基酸序列具有90％同一性且具有相同功能的蛋白质。
10、上述a2)所述的蛋白质中，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。
11、上述a3)所述的蛋白质中，“同一性”包括与本专利技术的序列1所示的氨基酸序列具有90％或更高，或91％或更高，或92％或更高，或93％或更高，或94％或更高，或95％或更高，或96％或更高，或97％或更高，或98％或更高，或99％或更高同源性的氨基酸序列。
12、上述a1)或a2)或a3)所述的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
13、上述产品或重组鼠疫耶尔森菌中，所述sorf17蛋白编码基因可为如下b1)或b2)或b3)所示的基因：
14、b1)序列2所示的dna分子；
15、b2)与b1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码sorf17蛋白的dna分子；
16、b3)在严格条件下与b1)或b2)限定的核苷酸序列杂交，且编码sorf17蛋白的dna分子。
17、这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
18、上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。
19、所述严格条件是在2×ssc，0.1％sds的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min；或，0.5×ssc，0.1％sds的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×sspe(或0.1×ssc)、0.1％sds的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。
20、上述产品或重组鼠疫耶尔森菌中，使所述ev76菌株中的sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的方法可为抑制ev76菌株中的sorf17蛋白活性或抑制ev76菌株中的sorf17蛋白编码基因的表达或敲除ev76菌株中的sorf17蛋白编码基因。
21、进一步的，所述敲除ev76菌株中的sorf17蛋白编码基因的方法为将敲除sorf17蛋白编码基因的物质导入ev76菌株。
22、更进一步的，所述敲除sorf17蛋白编码基因的物质为利用λ-red重组技术敲除sorf17基因的物质。
23、在本专利技术的一个具体实施例中，所述利用λ-red重组技术敲除sorf17基因的物质为序列表中序列3所示的dna分子。
24、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了上述重组鼠疫耶尔森菌的新用途。
25、本专利技术提供了上述重组鼠疫耶尔森菌在制备预防和/或治疗鼠疫的产品中的应用。
26、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了sorf17蛋白或其相关的生物材料的新用途。
27、本专利技术提供了sorf17蛋白或其相关的生物材料在调控ev76菌株毒力中的应用。
28、所述生物材料为编码sorf17蛋白的核酸分子、或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物。所述编码sorf17蛋白的核酸分子为序列2所示的dna分子。
29、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了使sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的物质的新用途。
30、本专利技术提供了使sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的物质在如下c1)-c3)任一种中的应用：
31、c1)降低ev76菌株毒力；
32、c2)制备sorf17基因敲除株；
33、c3)制备预防和/或治疗鼠疫的产品。
34、上述应用中，所述使sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的物质可为抑制ev76菌株中的sorf17蛋白活性的物质或抑制ev76菌株中的sorf17蛋白编码基因的表达的物质或敲除ev76菌株中的sorf17蛋白编码基因的物质。
35、进一步的，所述抑制sorf17蛋白活性的物质可为以任何方式实现ev76菌株中sorf17蛋白失去活性的物质，如抑制sorf17蛋白合成或促进sorf17蛋白降解或抑制sorf17蛋白功能的蛋白质、多肽或小分子化合物等。所述小分子化合物具体可为sorf17蛋白活性抑制剂。
36、所述抑制sorf17蛋白编码基因表达的物质可为以任何方式实现ev76菌株中sorf17基因无法表达的物质，具体方式可为去除或改变调节组分(如启动子编辑)使得sorf17基因序列不被转录、通过与mrna的结合阻止翻译等。进一步的，所述抑制sorf17蛋白编码基因表达的物质可为沉默sorf17基因或干扰sorf17基因表达的mirna、sirna、dsrna或shrna。
37、所述敲除sorf17蛋白编码基因的物质可为以任何方式实现ev76菌株不产生sorf17基因功能性本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种预防和/或治疗鼠疫的产品，其活性成分为sORF17蛋白或其编码基因功能缺失的EV76菌株；
2.根据权利要求1所述的产品，其特征在于：所述sORF17蛋白编码基因为如下b1)或b2)或b3)所示的基因：
3.一种重组鼠疫耶尔森菌，其为sORF17蛋白或其编码基因功能缺失的EV76菌株；
4.权利要求3所述的重组鼠疫耶尔森菌在制备预防和/或治疗鼠疫的产品中的应用。
5.sORF17蛋白在调控EV76菌株毒力中的应用；
6.与sORF17蛋白相关的生物材料在调控EV76菌株毒力中的应用；
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述与sORF17蛋白相关的生物材料为编码sORF17蛋白的核酸分子、或含有所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述编码sORF17蛋白的核酸分子为如下b1)或b2)或b3)所示的基因：
9.使sORF17蛋白或其编码基因功能缺失的物质在如下c1)-c3)任一种中的应用：
10.一种降低EV7
...【技术特征摘要】
1.一种预防和/或治疗鼠疫的产品，其活性成分为sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的ev76菌株；
2.根据权利要求1所述的产品，其特征在于：所述sorf17蛋白编码基因为如下b1)或b2)或b3)所示的基因：
3.一种重组鼠疫耶尔森菌，其为sorf17蛋白或其编码基因功能缺失的ev76菌株；
4.权利要求3所述的重组鼠疫耶尔森菌在制备预防和/或治疗鼠疫的产品中的应用。
5.sorf17蛋白在调控ev76菌株毒力中的应用；
6.与sorf17蛋白相关的生物材料在调控ev76菌株毒力中的应用；
7.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜宗敏，郭晓，杨瑞馥，曹诗洋，颜焱峰，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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