【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
在各个方面，本公开涉及在两性离子固定相上使样品流体中的核酸组分化合物彼此分离。
技术介绍
1、核糖核酸(rna)是一种聚合分子，其在基因的编码、解码、调控和表达中发挥多种重要的生物学作用。核糖核酸(rna)由核苷酸链形成，这些核苷酸链通过一个戊糖的3'-羟基基团与相邻戊糖的5'-羟基基团之间的磷酸二酯键连接。rna通常由四种不同类型的核苷酸组成。这些核苷酸由三种组分化合物组成：a)核碱基，b)d-核糖，和c)磷酸基团。核碱基通常来自两种n-杂环类别，即嘧啶和嘌呤。两种嘌呤型碱基是腺嘌呤(a)：和鸟嘌呤(g)：并且两种嘧啶型碱基是胞嘧啶(c)：和尿嘧啶(u)：d-核糖和碱的组合被称为核苷，这些核苷包括腺苷：鸟苷：胞苷：和尿苷：核苷酸也可称为“核苷磷酸”，诸如“核苷一磷酸”、“核苷二磷酸”或“核苷三磷酸”，这取决于有多少磷酸单元构成磷酸基团。核苷一磷酸包括腺苷一磷酸：鸟苷一磷酸：胞苷一磷酸：和尿苷一磷酸：核苷酸还以核苷三磷酸形式(例如，腺苷三磷酸(atp)、鸟苷三磷酸(gtp)、胞苷三磷酸(ctp)和尿苷三磷酸(utp))在代谢中发挥作用。
2、另一种重要的磷酸是核糖5-磷酸：其为磷酸戊糖途径(一种代谢途径)的产物和中间体，该代谢途径是还原性生物合成的nadph生成的关键来源。
3、对这些组分的分析对于许多研究领域是至关重要的，包括但不限于疾病监测、代谢组学途径分析和消费品的营养监测。
技术实现思路
1、在各个方面，本公开涉及使样品流体中的核酸组分化合物彼此分离
2、在一些实施方案中，本公开涉及一种方法，该方法包括：(a)将包含多种核酸组分化合物的样品流体上样到色谱柱上，该色谱柱包括容纳在该柱内部的两性离子固定相；(b)使流动相在一段时间内流过该色谱柱，从而形成洗脱液，其中该多种核酸组分化合物中的至少一些核酸组分化合物彼此分离，该流动相包含极性非质子溶剂、质子溶剂和挥发性缓冲盐，其中使该流动相流动包括在该一段时间的至少一部分时间内改变该质子溶剂与该极性非质子溶剂的比例，以及在该一段时间的至少一部分时间内改变该挥发性缓冲盐的离子强度。
3、在一些实施方案中，这些方法还包括对洗脱液进行质谱分析。质谱分析可例如以正离子模式、以负离子模式或以这两者进行。
4、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，两性离子固定相是颗粒状固定相。
5、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，两性离子固定相包含(i)本体材料和(ii)共价连接至该本体材料的两性离子表面基团，这些两性离子表面基团包含带正电部分和带负电部分。
6、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，两性离子固定相包含本体材料和与该本体材料的表面共价连接的两性离子聚合物，该两性离子聚合物包含一种或多种单体残基，该一种或多种单体残基包含酰胺或脲部分、带正电部分和带负电部分。
7、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，该带正电部分是季铵部分，并且该带负电部分选自硫酸盐部分、磺酸盐部分、磷酸盐部分或膦酸盐部分。
8、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，色谱柱的内表面包含(c2-c10)烷基甲硅烷基涂层。
9、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，核酸组分化合物包括rna组分化合物。例如，rna组分化合物可选自核碱基、核苷、核苷酸和磷酸核糖。
10、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，质子溶剂选自水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、叔丁醇以及它们的共混物。
11、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，极性非质子溶剂选自乙腈、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲醚以及它们的共混物。
12、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，挥发性缓冲盐包含有机酸阴离子和选自铵阳离子和胺阳离子的阳离子。例如，有机酸阴离子可选自甲酸根、乙酸根、丙酸根、丁酸根、草酸根、丙二酸根、琥珀酸根、马来酸根、戊二酸根、乙醇酸根、乳酸根、苹果酸根、柠檬酸根、葡萄糖酸根以及它们的组合，并且阳离子可选自铵阳离子、甲基铵阳离子、甲基二铵阳离子、乙基铵阳离子、乙基二铵阳离子、二乙基铵阳离子、二乙醇铵阳离子、氨基丁三醇阳离子、胆碱阳离子、吡咯烷阳离子、吡咯鎓阳离子、哌嗪鎓阳离子、吡啶鎓阳离子以及它们的组合。
13、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，使流动相流动包括合并不同相对量的(a)包含挥发性缓冲盐的水溶液的第一流动相组分和(b)包含极性非质子溶剂的第二流动相组分。
14、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，使流动相流动包括合并不同相对量的(a)包含挥发性缓冲盐的水溶液的第一流动相组分、(b)包含极性非质子溶剂的第二流动相组分和(c)包含质子溶剂的第三流动相组分。
15、在可与前述实施方案一起使用的一些实施方案中，第一流动相组分具有2.0至4.0范围内的ph。
16、在可与前述实施方案结合使用的一些实施方案中，样品流体包含多种核酸组分化合物、质子溶剂、极性非质子溶剂和有机酸。在特定实施方案中，样品流体包含多种核酸组分化合物、水、乙腈和甲酸。
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1.一种方法，所述方法包括：(a)将包含多种核酸组分化合物的样品流体上样到色谱柱上，所述色谱柱包括容纳在所述柱内部的两性离子固定相；(b)使流动相在一段时间内流过所述色谱柱，从而形成洗脱液，其中所述多种核酸组分化合物中的至少一些核酸组分化合物彼此分离，所述流动相包含极性非质子溶剂、质子溶剂和挥发性缓冲盐，其中使所述流动相流动包括在所述一段时间的至少一部分时间内改变所述质子溶剂与所述极性非质子溶剂的比例，以及在所述一段时间的至少一部分时间内改变所述挥发性缓冲盐的离子强度。
2.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括对所述洗脱液进行质谱分析。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相是颗粒状固定相。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相包含(i)本体材料和(ii)共价连接至所述本体材料的两性离子表面基团，所述两性离子表面基团包含带正电部分和带负电部分。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相包含本体材料和与所述本体材料的表面共价连接的两性离子聚合物，所述两性
6.根据权利要求4至5中任一项所述的方法，其中所述带正电部分是季铵部分，并且所述带负电部分选自硫酸盐部分、磺酸盐部分、磷酸盐部分或膦酸盐部分。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述色谱柱的内表面包含(C2-C10)烷基甲硅烷基涂层。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述核酸组分化合物包括RNA组分化合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述RNA组分化合物选自核碱基、核苷、核苷酸和磷酸核糖。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂选自水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、叔丁醇以及它们的共混物。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂是水。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述极性非质子溶剂选自乙腈、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲醚以及它们的共混物。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述极性非质子溶剂是乙腈。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述挥发性缓冲盐包含有机酸阴离子和选自铵阳离子和胺阳离子的阳离子。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述有机酸阴离子选自甲酸根、乙酸根、丙酸根、丁酸根、草酸根、丙二酸根、琥珀酸根、马来酸根、戊二酸根、乙醇酸根、乳酸根、苹果酸根、柠檬酸根、葡糖酸根以及它们的组合。
16.根据权利要求13至14中任一项所述的方法，其中所述阳离子选自铵阳离子、甲基铵阳离子、甲基二铵阳离子、乙基铵阳离子、乙基二铵阳离子、二乙基铵阳离子、二乙醇铵阳离子、氨基丁三醇阳离子、胆碱阳离子、吡咯烷阳离子、吡咯鎓阳离子、哌嗪鎓阳离子、吡啶鎓阳离子以及它们的组合。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中使所述流动相流动包括合并不同相对量的(a)包含所述挥发性缓冲盐的水溶液的第一流动相组分和(b)包含所述极性非质子溶剂的第二流动相组分。
18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中使所述流动相流动包括合并不同相对量的(a)包含所述挥发性缓冲盐的水溶液的第一流动相组分、(b)包含所述极性非质子溶剂的第二流动相组分和(c)包含所述质子溶剂的第三流动相组分。
19.根据权利要求17至18中任一项所述的方法，其中所述第一流动相组分具有2.0至4.0范围内的pH。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中对所述洗脱液进行质谱分析，并且其中质谱仪以正离子模式操作。
21.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中对所述洗脱液进行质谱分析，并且其中所述质谱仪以负离子模式操作。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述样品流体包含所述多种核酸组分化合物、质子溶剂、极性非质子溶剂和有机酸。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述样品流体包含所述多种核酸组分化合物、水、乙腈和甲酸。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种方法，所述方法包括：(a)将包含多种核酸组分化合物的样品流体上样到色谱柱上，所述色谱柱包括容纳在所述柱内部的两性离子固定相；(b)使流动相在一段时间内流过所述色谱柱，从而形成洗脱液，其中所述多种核酸组分化合物中的至少一些核酸组分化合物彼此分离，所述流动相包含极性非质子溶剂、质子溶剂和挥发性缓冲盐，其中使所述流动相流动包括在所述一段时间的至少一部分时间内改变所述质子溶剂与所述极性非质子溶剂的比例，以及在所述一段时间的至少一部分时间内改变所述挥发性缓冲盐的离子强度。
2.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括对所述洗脱液进行质谱分析。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相是颗粒状固定相。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相包含(i)本体材料和(ii)共价连接至所述本体材料的两性离子表面基团，所述两性离子表面基团包含带正电部分和带负电部分。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述两性离子固定相包含本体材料和与所述本体材料的表面共价连接的两性离子聚合物，所述两性离子聚合物包含一种或多种单体残基，所述一种或多种单体残基包含酰胺或脲部分、带正电部分和带负电部分。
6.根据权利要求4至5中任一项所述的方法，其中所述带正电部分是季铵部分，并且所述带负电部分选自硫酸盐部分、磺酸盐部分、磷酸盐部分或膦酸盐部分。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述色谱柱的内表面包含(c2-c10)烷基甲硅烷基涂层。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述核酸组分化合物包括rna组分化合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述rna组分化合物选自核碱基、核苷、核苷酸和磷酸核糖。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂选自水、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、叔丁醇以及它们的共混物。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述质子溶剂是水。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述极性非质子溶剂选自乙...
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