抑制HSP90与IAP蛋白的蛋白-蛋白相互作用的化合物制造技术

本文提供了抑制Ｈｓｐ９０与存活蛋白，ＸＩＡＰ，ｃＩＡＰ１或ｃＩＡＰ２等ＩＡＰ蛋白相互作用的化合物，以及鉴定和应用这类化合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制热休克蛋白Hsp90与凋亡抑制物(IAP)蛋白之间的蛋白-蛋白相互作用的化合物，以及鉴定和利用这样的化合物的方法，所述化合物例如肽和肽衍生物，所述IAP蛋白例如存活蛋白(Survivin)，XIAP，cIAP1或cIAP2。
技术介绍
肿瘤细胞在高度不利环境中存活并增殖的能力增强。例如，肿瘤细胞下调了多个阻止正常(即非-癌)细胞在有利环境中分裂的细胞途径。肿瘤细胞还灭活了使多种正常组织在有害条件下死亡的凋亡途径。肿瘤细胞上调了维持活性增殖所必需的途径。例如，很多肿瘤细胞活化了细胞中使它们能合成并维持持续增殖所需的蛋白机制的应激-反应途径(stress-responsepathway)。肿瘤中活化的应激反应包括上调热休克蛋白(Hsp)，这些蛋白是ATPase-指导的陪伴分子(chaperones)。尤其是，Hsp90在多种癌组织中上调。Hsp90控制着有限量客户蛋白(client protein)的折叠/成熟与蛋白酶体破坏之间的平衡，而这些蛋白中有一些参与了信号传导和细胞增殖。凋亡抑制物(IAP)蛋白家族的成员的特征包括一或多个杆状病毒IAP重复区。这些蛋白最初是因它们通过阻止昆虫宿主细胞防御性凋亡来促进杆状病毒繁殖的能力而被鉴定出来的。存活蛋白是IAP家族的小分子16.5kDa哺乳动物成员，它在胚和胎的器官中广泛表达，但在大多数终末分化的正常组织中几乎无法检测到。但存活蛋白在多种肿瘤组织中高水平表达，而且被认为参与很多肿瘤细胞避免细胞死亡并持续增殖的机制中。专利技术概述本专利技术是基于，至少是部分基于，在存活蛋白、cIAP1、cIAP2和XIAP等凋亡抑制物(IAP)蛋白中发现了介导与热休克蛋白Hsp90之间蛋白-蛋白相互作用的特定区域，例如结合域或基序。这些区域被鉴定为具有介导这些IAP蛋白(例如存活蛋白)的抗-凋亡活性的特征。本专利技术提供了鉴定能破坏Hsp90与IAP蛋白相互作用的化合物的方法。能抑制Hsp90与存活蛋白等IAP蛋白之间的蛋白-蛋白相互作用的化合物，例如肽、肽衍生物、肽模拟物以及小分子，都可以用于治疗与不需要的(unwanted)细胞增殖相关的情况(condition)，例如癌症一方面，本专利技术包括分离的化合物，其抑制Hsp90和存活蛋白之间的蛋白-蛋白相互作用。在多个实施方案中，所述化合物是分离的存活蛋白肽，其包含His-Ser-Ser-Gly-Cys(SEQ ID NO2)或Lys-His-Ser-Ser-Gly(SEQ IDNO26)，并且长度为50或更少，45或更少，40或更少，35或更少，30或更少，25或更少，20或更少，15或更少，12或更少，11或更少，10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，或5个氨基酸。存活蛋白肽的例子包括His-Ser-Ser-Gly-Cys(SEQ ID NO2)，Lys-His-Ser-Ser-Gly-Cys-Ala-Phe-Leu-Ser-Val-Lys(SEQ ID NO3)，Ile-Asp-Asp-His-Lys-Lys-His-Ser-Ser-Gly-Cys-Ala-Phe-Leu(SEQ ID NO4)，以及Lys-Lys-His-Ser-Ser-Gly-Cys-Ala-Phe-Leu(SEQ ID NO5)。在一些实施方案中，分离的存活蛋白肽与增强所述化合物的细胞通透性的异源序列相连，所述异源序列例如肽内化序列(如，Tat，触角足(antennapedia)，vβRR，transportin，或transportan序列)。触角足肽内化序列例如是RQKIWFQNRRMKWKK；(SEQ ID NO29)。在一些实施方案中，所述化合物是本文所述存活蛋白肽的肽模拟物，例如，所述化合物可以是反构型-肽(retro-peptide)、反排列肽(inverso-peptide)，和/或所述化合物可以包括一或多种人工氨基酸类似物。肽模拟物也可以与肽内化序列等异源序列相连。肽衍生物包括，例如与肽内化序列相连的肽和肽模拟物。本专利技术还提供了编码本文所述存活蛋白肽和肽衍生物的核酸，以及含有这些核酸的重组细胞。另一方面，本文公开了与本文所述肽或肽衍生物结合的抗-存活蛋白抗体，例如细胞内抗体(intrabodies)。这样的抗体的实例包括对能产生抗体的动物施用本文所述肽或肽衍生物所产生的抗体。另一方面，本专利技术还提供了制备肿瘤生长的小分子抑制物的方法。通常，这些方法包括提供一种先导化合物(lead compound)，例如本文所述存活蛋白肽或肽衍生物，运用医学化学方法研发与该先导化合物结构类似的化合物，可选地(optionally)，测定该候选化合物是否抑制肿瘤细胞生长。可以将该候选化合物配制在药用载体中，从而制备肿瘤生长的小分子抑制物。另一方面，本专利技术包括鉴定候选的诱导凋亡的化合物的筛选方法。这些方法一般包括(i)将受试化合物、Hsp90肽以及IAP肽(例如存活蛋白)在足以确保相互作用(例如结合)的条件下混合足够的时间；和(ii)检测受试化合物是否抑制Hsp90肽与IAP肽之间的蛋白-蛋白相互作用。抑制Hsp90肽与IAP肽(例如存活蛋白肽)之间蛋白-蛋白相互作用的受试化合物是候选的诱导凋亡的化合物。另一方面，本专利技术涉及鉴定候选的诱导凋亡的化合物的筛选方法。这些方法一般包括(i)对表达Hsp90和IAP肽(例如存活蛋白肽)的细胞(例如，在体内的肿瘤细胞或在培养中的肿瘤细胞)施用所述化合物，和(ii)测量Hsp90肽和IAP肽(例如存活蛋白)之间的相互作用，例如结合。可减少Hsp90肽和IAP肽(例如存活蛋白)之间相互作用的化合物是候选的诱导凋亡的化合物。另一方面，本专利技术涉及鉴定凋亡诱导物的筛选方法，这些方法一般包括将肿瘤细胞与本文所述方法鉴定出的候选的诱导凋亡的化合物接触；和检测一或多种凋亡标记物的有无。使细胞表现出一或多种凋亡标记物的候选诱导凋亡的化合物是凋亡诱导物。本文还描述了鉴定肿瘤生长抑制物的筛选方法，这些方法一般包括将一或多种肿瘤细胞与本文所述方法鉴定出的候选的诱导凋亡的化合物接触；和测量所述肿瘤细胞的增殖。当一种候选的诱导凋亡的化合物使所述肿瘤细胞的增殖相对于未接触所述化合物的一或多种肿瘤细胞的增殖而言受到抑制，则该化合物是肿瘤生长抑制物。另一方面，本专利技术还涉及治疗受试者的肿瘤的方法，包括(i)鉴别需要治疗肿瘤的受试者；和(ii)对该受试者施用本文所述任一种抑制Hsp90和存活蛋白之间蛋白-蛋白相互作用的化合物的药物组合物。在治疗受试者肿瘤的方法中使用的药物组合物包括抑制Hsp90和存活蛋白之间蛋白-蛋白相互作用的存活蛋白肽(或肽衍生物)和/或抗存活蛋白抗体。另一方面，治疗受试者肿瘤的方法包括(i)鉴别需要治疗肿瘤的受试者；和(ii)对该受试者施用含有本文所述方法鉴定出的化合物或受试物的药物组合物。本专利技术还涉及抑制细胞中Hsp90与IAP多肽之间相互作用的方法，该方法包括将有效量的本文所述化合物或药物组合物导入所述细胞中。术语“蛋白”，“多肽”以及“肽”表示任意氨基酸链，不管它们有多长或者经过了什么样的翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)，除非特别指明，这些术语在本文中可互换使用。术语“分离的肽”和“分离的本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的存活蛋白肽片段，具有１１个或更少的氨基酸，包含５个氨基酸的序列Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｃｙｓ（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２），可抑制Ｈｓｐ９０与存活蛋白之间的蛋白－蛋白相互作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：达里奥C奥尔蒂里，珍妮特普莱西亚，惠特妮萨尔兹，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]