【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物抗病分子育种领域，涉及一种分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、近几十年来，奶业集约化饲养程度不断加强，并一味追求高产，奶牛产后疾病日趋突出。在泌乳初期，由于能量负平衡的存在，奶牛的代谢负荷显著增加，容易发生感染性和代谢性疾病。酮病是奶牛场最常见的代谢疾病之一，多发生于高产奶牛。患有酮病的奶牛其产奶、繁殖性能和免疫能力降低，罹患其他围产期疾病的风险也更高。酮病抗性/易感性是一种功能性状，从遗传育种的角度提高奶牛的抗性，降低酮病发生率，是解决该问题的重要途径。因此，鉴定影响奶牛酮病抗性/易感性的功能基因和标记并解析其调控机制，可为高酮病抗性牛的分子育种工作奠定基础。
技术实现思路
1、乙酰辅酶a酰基转移酶2(acaa2，acetyl-coenzyme a acyltransferase 2)是线粒体硫解酶家族的一员，编码3-酮酰基辅酶a硫解酶，通过催化脂肪酸β-氧化路径的最后一步，以及酮体合成的第一步，参与脂肪酸的β-氧化和酮体的代谢。acaa2在通路中处于节点位置，是脂质代谢中的关键基因。acaa2基因在人类、黑猩猩、恒河猴、奶牛、小鼠等物种中是保守的，广泛表达于肝脏、肾脏等组织中。据专利技术人研究了解，acaa2可促进绵羊前体脂肪细胞向脂肪细胞的分化。acaa2基因3'ut
2、启动子结构一般包括两部分，分别为上游调控元件和核心启动子元件。专利技术人经过研究发现，acaa2基因核心启动子区域功能遗传变异与bhb(β-羟丁酸)浓度显著相关，可以作为牛酮病抗性分子标记。
3、基于上述研究成果，本专利技术提供了一种分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，具体地，技术方案如下：
4、一方面，一种分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，所述分子标记为acaa2基因核心启动子区遗传变异g.-424g>c。
5、经群体基因分型并与血液bhb浓度关联分析表明，acaa2基因遗传变异g.-424g>c，cc型奶牛血液bhb浓度显著低于gg和gc基因型。
6、在一些实施例中，所述分子标记位于seq id no:3所示序列的第231位，核苷酸为g或c。
7、在一些实施例中，所述检测牛酮病抗性试剂为检测奶牛酮病抗性试剂。
8、在一些实施例中，所述检测牛酮病抗性试剂包括引物组，所述引物组的序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示。
9、在一些实施例中，利用制备检测牛酮病抗性试剂进行检测的方法为：对牛血液中dna进行提取，进行pcr扩增并测序，对奶牛个体进行基因分型，将不同基因型与血液bhb浓度进行关联分析。
10、另一方面，一种筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法，采集奶牛血液，提取血液dna，进行pcr扩增并测序，对acaa2基因核心启动子片段第231位点进行基因分型，根据基因型评价奶牛个体的酮病抗性/易感性；其中，acaa2基因核心启动子片段如seq id no:3所示。由于cc基因型奶牛样品的血液bhb浓度显著低于gg和gc基因型奶牛个体(p<0.01)。因此，cc基因型奶牛个体，奶牛血液bhb浓度较低，是酮病抗性的奶牛个体；gg和gc基因型奶牛个体，奶牛血液bhb浓度较高，是酮病易感性的奶牛个体。
11、在一些实施例中，进行pcr扩增的引物序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示。
12、第三方面，一种上述筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法在奶牛早期辅助选择育种中的应用。通过对acaa2基因核心启动子区遗传变异进行基因分型，基于分型结果，筛选出高酮病抗性奶牛个体，进行奶牛的标记辅助选择育种。
13、在一些实施例中，筛选cc基因型奶牛个体进行奶牛的标记辅助选择育种。
14、本专利技术一个或多个实施例具有以下有益效果：
15、(1)本公开提供了acaa2基因核心启动子区遗传变异g.-424g>c，并与奶牛血液bhb浓度显著相关，cc基因型个体的血液bhb浓度显著低于gg和gc基因型个体(p<0.01)，cc基因型时acaa2基因的启动子活性显著降低，表明cc基因型是酮病抗性基因型。
16、(2)本公开提供了acaa2基因核心启动子区域，与奶牛血液bhb浓度显著关联的遗传变异位点g.-424g>c，通过测序分析遗传变异位点的基因型，可对奶牛酮病抗性/易感个体进行筛选，用于奶牛的早期标记辅助选择。
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1.一种分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述分子标记为ACAA2基因核心启动子区遗传变异g.-424G>C。
2.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述分子标记位于SEQ ID NO:3所示序列的第231位，核苷酸为G或C。
3.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述检测牛酮病抗性试剂为检测奶牛酮病抗性试剂。
4.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述检测牛酮病抗性试剂包括引物组，所述引物组的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
5.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，利用制备检测牛酮病抗性试剂进行检测的方法为：对牛血液中DNA进行提取，进行PCR扩增并测序，对奶牛个体进行基因分型，将不同基因型与血液BHB浓度进行关联分析。
6.一种筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法，其特征是，采集奶牛血液，提取血液DNA，进行PCR扩增并测序，对A
7.如权利要求6所述的筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法，其特征是，CC基因型奶牛个体是酮病抗性的奶牛个体；GG和GC基因型奶牛个体是酮病易感性的奶牛个体。
8.如权利要求6所述的筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法，其特征是，进行PCR扩增的引物序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
9.一种权利要求6～8任一所述的筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法在奶牛早期辅助选择育种中的应用。
10.如权利要求9所述的筛选酮病抗性/易感性奶牛的方法在奶牛早期辅助选择育种中的应用，其特征是，筛选CC基因型奶牛个体进行奶牛的标记辅助选择育种。
...【技术特征摘要】
1.一种分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述分子标记为acaa2基因核心启动子区遗传变异g.-424g>c。
2.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述分子标记位于seq id no:3所示序列的第231位，核苷酸为g或c。
3.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述检测牛酮病抗性试剂为检测奶牛酮病抗性试剂。
4.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，所述检测牛酮病抗性试剂包括引物组，所述引物组的序列分别如seq id no:1和seq id no:2所示。
5.如权利要求1所述的分子标记在制备检测牛酮病抗性试剂中的应用，其特征是，利用制备检测牛酮病抗性试剂进行检测的方法为：对牛血液中dna进行提取，进行pcr扩增并测序，对奶牛个体进行基因分型，将不同基因型与血液bhb浓度进行关联分析。...
【专利技术属性】
技术研发人员：鞠志花，石雨生，黄金明，高亚平，姜强，王金鹏，肖遥，王秀革，魏晓超，杨春红，张亚冉，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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