一种猪肌内脂肪细胞来源外泌体的提取方法及应用技术

技术编号:40078404 阅读:20 留言:0更新日期:2024-01-17 02:00
本发明专利技术公开了一种猪肌内脂肪细胞来源外泌体的提取方法及应用,将猪肌内脂肪细胞培养上清液进行低速离心和一次超速离心;重悬,加入蔗糖溶液后进行二次超速离心,弃上清液后将外泌体沉淀重悬,保存在‑80℃。本发明专利技术将超速离心法和密度梯度离心法结合,可以提高从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的产量。并且所获得的猪肌内前体脂肪细胞来源的外泌体能提高氧化型肌纤维的比例,可以用于改善猪肉品质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及家畜品种培育及性状改良,尤其涉及利用从猪肌内脂肪细胞提取的外泌体调控肌纤维类型转化。


技术介绍

1、为消费者提供优质猪肉是养猪业可持续发展的首要问题。骨骼肌占肉猪胴体的45%-65%,是供人类食用的主要部分,而肌细胞是骨骼肌最主要的结构单元。肌细胞的脂质含量、氧化型肌纤维/糖酵解型肌纤维相对比例等因素直接影响猪肉颜色和嫩度等肉质性状。例如常见的三元杂交猪,其骨骼肌中氧化型肌纤维比例远低于糖酵解型肌纤维,而前者的比例在一些肉质性状优良的地方猪品系中有所提高。

2、猪骨骼肌中肌内脂肪细胞与肌细胞直接接触,二者互作的“纽带”包括彼此分泌的细胞因子、代谢产物和外泌体。外泌体是一类多种细胞分泌的直径40-160nm的胞外囊泡,存在于细胞外环境和体液中,包括血液、尿液、羊水、精液和体外细胞培养上清等。外泌体内含有多种核酸、蛋白质、脂质和其他功能性物质,故可从基因、表观修饰和蛋白水平同时调控靶细胞内多种信号通路,以及介导细胞和组织间的信息交流,对多种生理活动具有调控作用。肌内脂肪细胞作为一类重要的细胞群,其分泌的外泌体中含有各种蛋白质,且不同发本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述猪肌内前体脂肪细胞是从仔猪肌肉组织中分离后经培养获得的原代或经过传代的肌内脂肪细胞。

3.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤1中,传代培养至细胞覆盖率≥80%时收集培养上清液。

4.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤1中,传代培养的条件包括:35-39℃、CO2浓度为4%-6%,采用无外泌体的完全培养基。</p>

5.根据...

【技术特征摘要】

1.一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述猪肌内前体脂肪细胞是从仔猪肌肉组织中分离后经培养获得的原代或经过传代的肌内脂肪细胞。

3.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤1中,传代培养至细胞覆盖率≥80%时收集培养上清液。

4.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤1中,传代培养的条件包括:35-39℃、co2浓度为4%-6%,采用无外泌体的完全培养基。

5.根据权利要求1所述一种从猪肌内脂肪细胞提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤2中,低速离心的条件依次为:3-5℃、100×g-200×g离心8-11min,3-5℃、300×g-500×g离心29-31min,3-5℃、1000×g-10000×g离心19-...

【专利技术属性】
技术研发人员:庞卫军赵甜甜喻赫贺昭昭闫文勇伊旭东
申请(专利权)人:西北农林科技大学
类型:发明
国别省市:

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