哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联ＤＮＡ疫苗的制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联ＤＮＡ疫苗的制备方法和应用，其特征是将哈维氏弧菌ｏｐｐＡ基因和副溶血弧菌ｔｄｈ２基因通过６个核苷酸ＧＡＡＴＴＣ相连成的ｔｄｈ２－ｏｐｐＡ融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：使基因ｔｄｈ２和ｏｐｐＡ克隆到线性载体ｐＭＤ１９－Ｔ?Ｓｉｍｐｌｅ中；再通过双酶切技术，将该融合基因插入到真核表达载体ｐＥＧＦＰ－Ｎ１中构建得到ｐＥＧＦＰ－Ｎ１－ｔｄｈ２－ｏｐｐＡ融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；最后用常规的方法制成哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联ＤＮＡ疫苗悬液，以１００μｌ／尾的剂量对鱼类进行免疫。本发明专利技术操作性强重复率高，安全无毒副作用，可对鱼类双重免疫保护，免疫效果较灭活疫苗、重组蛋白疫苗及普通ＤＮＡ疫苗高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联ＤＮＡ疫苗，其特征在于：在真核表达载体上连接入副溶血弧菌溶血素亚单位基因ｔｄｈ２和哈维氏弧菌寡肽结合蛋白基因ｏｐｐＡ通过６个核苷酸ＧＡＡＴＴＣ相连而成的ｔｄｈ２－ｏｐｐＡ融合基因，其中ｔｄｈ２－ｏｐｐＡ融合基因的ＤＮＡ序列为：ＡＴＧＡＡＧＴＡＣＣＧＡＴＡＴＴＴＴＧＣＡＡＡＡＡＡＡＴＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＴＡＴＣＣＡＴＧＴＴＧＧＣＴＧＣＡＴＴＣＡＡＡＡＣＡＴＴＴＧＣＣＴＴＴＧＡＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＧＴＣＣＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧＧＴＴＣＴＧＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＡＡＧＧＣＧＧＴＡＧＡＴＧＣＧＣＡＣＡＣＡＣＴＡＧＴＴＧＴＴＧＡＡＣＴＴＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＴＣＡＡＴＧＡＡＧＣＣＡＧＴＴＣＡＣＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＴＣＧＡＧＡＡＡＴＡＣＧＧＴＧＡＴＣＡＡＴＧＧＡＣＴＡＡＧＣＣＴＧＧＴＣＡＴＴＴＴＧＴＴＧＧＴＡＡＣＧＧＴＧＣＴＴＡＣＧＡＡＣＴＴＧＡＴＡＡＧＴＧＧＧＴＣＧＴＡＡＡＣＧＡＧＣＧＴＡＴＧＧＴＴＣＴＧＡＡＧＣＧＣＡＡＣＧＴＧＣＡＧＴＡＣＴＧＧＧＡＴＡＡＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＧＴＧＡＴＴＧＡＴＡＡＡＧＴＡＡＣＧＴＴＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＧＡＡＡＡＴＣＡＡＡＡＴＧＣＧＧＡＡＡＴＧＡＡＴＣＧＣＴＴＴＴＴＧＴＣＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＣＡＧＡＴＧＡＴＴＴＧＣＣＧＡＴＴＧＡＡＣＡＣＴＴＴＡＡＧＣＧＣＡＴＧＣＡＡＡＡＡＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＣＣＧＴＴＧＴＴＧＧＣＡＧＴＣＴＧＴＧＴＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＡＣＡＴＡＴＴＴＡＡＣＡＣＴＡＡＧＡＡＡＡＡＧＣＣＧＴＴＴＡＡＣＧＡＣＴＣＴＣＧＴＧＴＴＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＣＴＴＡＴＧＣＧＡＴＴＧＡＴＣＧＴＧＡＴＡＴＣＧＴＡＧＣＧＡＡＴＧＣＴＡＴＴＡＴＧＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＡＡＡＧＣＣＡＧＣＧＴＡＴＴＴＣＴＴＡＡＣＡＣＣＴＧＡＧＡＴＡＡＣＡＧＣＣＧＧＣＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＧＧＡＴＧＡＣＧＣＡＡＡＡＡＧＡＧＣＧＣＡＡＣＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＣＣＣＧＡＣＴＧＣＴＡＧＣＣＧＡＡＧＣＡＧＧＡＴＡＴＧＧＴＡＡＡＧＡＴＡＡＴＣＣＣＴＴＡＧＡＧＴＴＴＡＣＡＴＴＣＣＴＧＴＡＴＡＡＣＡＣＡＧＡＴＧＡＡＡＡＣＣＡＣＡＡＡＡＡＡＣＴＴＧＣＣＧＴＣＧＣＡＣＴＴＧＧＣＴＣＣＡＴＧＴＧＧＡＡＡＡＡＧＡＣＡＴＴＡＧＧＣＴＴＧＡＡＡＧ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈吉祥，刘瑞，何庆芳，徐广峰，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]