【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有降低的stt3和/或cwh8蛋白的表达和/或活性的遗传修饰的子囊菌类丝状真菌。所述遗传修饰的丝状真菌用于鲁棒地生产具有部分或没有n-连接的糖基化的重组蛋白。
技术介绍
1、具有翻译后蛋白质修饰例如糖基化或磷酸化的重组蛋白的表达和纯化只能使用真核表达系统来实现。包括哺乳动物和昆虫细胞系、植物和真菌在内的真核蛋白表达系统对于功能性真核蛋白的生产来说已变得不可或缺。
2、作为真核生物，酵母和真菌能够进行翻译后修饰，包括n-和o-糖基化，但酵母和真菌中的蛋白质糖基化与哺乳动物细胞中的不同。为了克服这些问题，已探索了重新工程化改造n-糖基化途径的可能性，特别是在最常用于生产异源蛋白的物种(例如酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)、解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)、多形汉逊酵母(hansenula polymorpha)以及曲霉属(aspergillus)和木霉属(trichoderma)物种)中。
3、pars...
【技术保护点】
1.一种遗传修饰的子囊菌类丝状真菌，其能够产生具有减少的N-连接的糖基化的或不含N-连接的糖基化的目标蛋白质，所述遗传修饰的丝状真菌包含具有降低的STT3和/或CWH8表达和/或活性的至少一个细胞。
2.根据权利要求1所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述至少一个细胞包含至少一种编码所述目标蛋白质的外源多核苷酸。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述至少一个细胞具有降低的STT3表达和/或活性。
4.根据权利要求3所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述STT3包含与Thermothelomyces heterot...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种遗传修饰的子囊菌类丝状真菌，其能够产生具有减少的n-连接的糖基化的或不含n-连接的糖基化的目标蛋白质，所述遗传修饰的丝状真菌包含具有降低的stt3和/或cwh8表达和/或活性的至少一个细胞。
2.根据权利要求1所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述至少一个细胞包含至少一种编码所述目标蛋白质的外源多核苷酸。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述至少一个细胞具有降低的stt3表达和/或活性。
4.根据权利要求3所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述stt3包含与thermothelomyces heterothallica stt3的氨基酸具有至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述thermothelomycesheterothallica stt3包含seq id no：27的氨基酸。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述至少一个细胞具有降低的cwh8表达和/或活性。
7.根据权利要求6所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述cwh8包含与thermothelomyces heterothallica cwh8的氨基酸具有至少75％、或至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述thermothelomycesheterothallica cwh8包含seq id no：28的氨基酸。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其包含具有降低的stt3和cwh8表达和/或活性的至少一个细胞。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述遗传修饰包括stt3基因的缺失或破坏，使得所述修饰的丝状真菌不能产生寡糖基转移酶(ost)复合物的催化亚基。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述遗传修饰包括cwh8基因的缺失或破坏，使得所述修饰的丝状真菌不能产生功能性多萜醇基(dolichyl)焦磷酸酯磷酸酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述子囊菌类丝状真菌属于盘菌亚门(pezizomycotina)中的属。
13.根据权利要求12所述的遗传修饰的丝状真菌，其中所述子囊菌类丝状真菌属于选自thermothelomyces、毁丝霉属(myceliophtho...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·切莱特，M·A·艾玛法布，M·马基宁，M·萨洛埃莫，
申请(专利权)人：二进国际美国有限公司，
类型：发明
国别省市：
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