【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒检测，具体涉及一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever,asf)是由非洲猪瘟病毒(african swinefevervirus,asfv)引起的高度传染性疫病，所有年龄段的野猪和家猪对其均易感，是一种表现为高热、网状内皮系统及内脏器官严重出血为特征的急性、热性、高度接触传染性疾病，其高死亡率和快速传播给全世界养猪生产造成巨大经济损失。自2018年在我国发现asfv疫情以来，asfv一直在突变进化，应用于该病的检测方法也不断地更新发展，从最早的建立的病毒分离鉴定法，到目前最常用的real-time pcr检测法，都是为寻找一种更为简便快速的检测方法。常规pcr、real-time pcr，elisa等，存在时间长，成本高，操作复杂等缺点，难以在大规模的基层生产中普及应用。近年来，环介导等温核酸扩增法(lamp)作为一种快速、简便、特异、灵敏的方法已被应用于各种疾病检测中，此方法是一种全新的核酸扩增技术，可依赖6条特异性引物，在bst dna聚合酶作用下等温反应几十分钟，即可完成扩增。目前，该技术已被广泛应用于各种动物疫病检测中。但asfv rt-lamp相关方面的报道仍较少。专利方面几乎是空白状态。
技术实现思路
1、针对
技术介绍
提出的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物组。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种非洲猪瘟病毒的lamp检测试剂盒。>
3、本专利技术的又一目的在于提供一种非洲猪瘟病毒的lamp非诊疗目的检测方法。
4、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
5、第一方面，本专利技术请求保护一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物组，该引物组包括一对外引物f3/b3、一对内引物fip/bip及两条环引物loop f/loop b；所述引物的核苷酸序列如下所示：
6、f3：aaggatctacaagcgtgta(seq id no.1)
7、b3：ttacctttggtattcccca(seq id no.2)
8、fip：tgggcagcttcaaacgtt-ctaagggtgtttggttgtc(seq id no.3)
9、bip：tgccaggatgaatgacatgc-gtacggagactttttccatg(seq id no.4)
10、loop f：cctcgcaacggatatgactgg(seq id no.5)
11、loop b：acccaatatatgatggcccacc(seq id no.6)。
12、第二方面，本专利技术请求保护一种非洲猪瘟病毒的lamp检测试剂盒，该试剂盒包含上述的lamp检测引物组。
13、进一步，所述的试剂盒中还包含：dntp，10×thermopol buffer，甜菜碱，mgso4，bst dna聚合酶。更进一步，所述试剂盒的25μl反应体系中各组分为：40μmol·l-1内引物fip/bip各1μl，5μmol·l-1外引物f3/b3各1μl，10μmol·l-1环引物lf/lb各0.75μl，10mmol·l-1dntp 3.5μl，10×thermopol buffer 2.5μl，甜菜碱2.5μl，100mmol·l-1mgso42.5μl，8000u·ml-1bst dna聚合酶1.2μl，模板cdna1.5μl，灭菌ddh2o补足。
14、第三方面，本专利技术请求保护一种非洲猪瘟病毒的lamp非诊疗目的检测方法，采用上述的试剂盒对非洲猪瘟病毒进行非诊疗目的检测。
15、进一步，该检测方法的25μl反应体系如下：40μmol·l-1内引物fip/bip各1μl，5μmol·l-1外引物f3/b3各1μl，10μmol·l-1环引物lf/lb各0.75μl，10mmol·l-1dntp 3.5μl，10×thermopol buffer 2.5μl，甜菜碱2.5μl，100mmol·l-1mgso4 2.5μl，8000u·ml-1bstdna聚合酶1.2μl，模板cdna1.5μl，灭菌ddh2o补足；
16、反应条件为：59℃恒温反应45min。
17、本专利技术的有益效果：
18、本研究成功建立了非洲猪瘟病毒lamp检测方法。该方法特异性高，与prv、pcv2、prrsv和pedv等均无交叉反应。将10份临床样品，用优化好的asfv-lamp方法和荧光定量pcr方法同步检测，结果1份为阳性，两者检测结果一致。敏感性与荧光定量pcr一致，最低检测限为102copies·μl-1，而且快速、便捷，可用于asfv的检测和临床诊断，具有较好应用前景。该方法对于条件的要求不高，不需要高昂价格的仪器设备，使用简单的水浴锅装置就能满足实验所需要的条件，具有良好的前景和应用价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物组，其特征在于，该引物组包括一对外引物F3/B3、一对内引物FIP/BIP及两条环引物Loop F/Loop B；所述引物的核苷酸序列如下所示：
2.一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1所述的LAMP检测引物组。
3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包含：dNTP，10×Thermopol Buffer，甜菜碱，MgSO4，Bst DNA聚合酶。
4.根据权利要求2或3所述的非洲猪瘟病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的25μL反应体系中各组分为：40μmol·L-1内引物FIP/BIP各1μL，5μmol·L-1外引物F3/B3各1μL，10μmol·L-1环引物LF/LB各0.75μL，10mmol·L-1dNTP 3.5μL，10×ThermopolBuffer 2.5μL，甜菜碱2.5μL，100mmol·L-1MgSO4 2.5μL，8000U·mL-1Bst DNA聚合酶1.2μL，模板cDNA 1
5.一种非洲猪瘟病毒的LAMP非诊疗目的检测方法，其特征在于，采用权利要求2～4中任一所述的试剂盒对非洲猪瘟病毒进行非诊疗目的检测。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，该检测方法的25μL反应体系如下：40μmol·L-1内引物FIP/BIP各1μL，5μmol·L-1外引物F3/B3各1μL，10μmol·L-1环引物LF/LB各0.75μL，10mmol·L-1dNTP 3.5μL，10×Thermopol Buffer 2.5μL，甜菜碱2.5μL，100mmol·L-1MgSO4 2.5μL，8000U·mL-1Bst DNA聚合酶1.2μL，模板cDNA 1.5μL，灭菌ddH2O补足；
...【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物组，其特征在于，该引物组包括一对外引物f3/b3、一对内引物fip/bip及两条环引物loop f/loop b；所述引物的核苷酸序列如下所示：
2.一种非洲猪瘟病毒的lamp检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1所述的lamp检测引物组。
3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟病毒的lamp检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包含：dntp，10×thermopol buffer，甜菜碱，mgso4，bst dna聚合酶。
4.根据权利要求2或3所述的非洲猪瘟病毒的lamp检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的25μl反应体系中各组分为：40μmol·l-1内引物fip/bip各1μl，5μmol·l-1外引物f3/b3各1μl，10μmol·l-1环引物lf/lb各0.75μl，10mmol·l-1dntp 3.5μl，10×thermopo...
【专利技术属性】
技术研发人员：白娟，伍子昂，姜平，高雁怩，刘星，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：
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