【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗佐剂，具体涉及一种含有葫芦多糖的疫苗佐剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、目前，家禽常用的疫苗主要是灭活疫苗和弱毒活疫苗，这些疫苗虽然能引发良好的体液免疫和细胞免疫应答，但不能诱导有效的黏膜免疫反应，而黏膜免疫是切断禽流感病毒入侵的重要途径之一。疫苗佐剂已被证明是疫苗中的关键成分，因此需要开发安全有效、且能引发多重免疫应答的疫苗佐剂来增强h9n2疫苗的免疫效果。尽管多年来一直在努力，但目前批准的佐剂数量较少。其中铝作为佐剂被批准用于动物，鲨烯类佐剂mf59和as03在欧洲和美国被批准用于流感疫苗。但这些佐剂往往存在一些缺点，如铝佐剂主要诱导th2型免疫应答，不诱导细胞介导的免疫应答；兽用油是一种诱导抗原抗体产生的优良佐剂，但诱导细胞介导的免疫应答能力较差。因上述问题使这些佐剂在临床应用上受到限制，因此，有必要开发安全有效的疫苗佐剂，以诱导体液、细胞及粘膜的免疫反应。
2、葫芦多糖不仅能激活t细胞、b淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞，还能激活补体，促进细胞因子的产生，从而在多种方式上对免疫系统发挥调节作用。然而，葫芦多糖作为疫苗佐剂存在靶向性差、作用时间短等缺点，因此需要提供一种可将葫芦多糖和具有良好缓释效果的纳米疫苗载体相结合制备出有效防御畜禽疾病的新一代的疫苗佐剂。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在葫芦多糖作为疫苗佐剂存在靶向性差、作用时间短的问题，本专利技术提供了一种含有葫芦多糖的疫苗佐剂及其制备方法和应用，能够有效提高的靶向性
2、为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下。
3、本专利技术的第一方面提供一种含有葫芦多糖的疫苗佐剂，所述疫苗佐剂是以聚乳酸-羟基乙酸为载体，将葫芦多糖和维甲酸负载在聚乳酸-羟基乙酸上，再用聚醚酰亚胺溶液对负载有葫芦多糖和维甲酸的聚乳酸-羟基乙酸的表面进行阳离子修饰得到的；
4、所述聚乳酸-羟基乙酸与所述维甲酸的质量比为220～225:2。
5、通过聚醚酰亚胺溶液的阳离子修饰，使得到的疫苗佐剂表面带有正电荷，能够将大量抗原吸附在疫苗佐剂，能够显著提高禽流感病毒的特异性igg和iga抗体的含量和细胞因子含量，且能够促进抗原转运到肠道黏膜，促进肠道的黏膜免疫反应，具有较好的免疫增强功能。
6、本专利技术的第二方面提供一种疫苗佐剂的制备方法，包括以下步骤：
7、将聚乳酸-羟基乙酸与维甲酸溶于有机溶剂中得到油相，将葫芦多糖溶液与油相混合，超声，到初乳；
8、将得到的初乳与f68溶液混合，超声后得到复乳，将复乳用聚醚酰亚胺进行阳离子修饰，过滤，得到的疫苗佐剂；
9、其中f68是表面活性剂，能够提高纳米佐剂颗粒的稳定性。
10、在一个优选的实施例中，所述葫芦多糖溶液与所述油相的体积比为1:3～5；
11、所述葫芦多糖溶液的浓度为2～3mg/ml；所述维甲酸在油相中的浓度为0.6～0.8mg/ml。
12、在一个优选的实施例中，所述有机溶剂为二氯甲烷；维甲酸能够更好地溶解在二氯甲烷。
13、在一个优选的实施例中，所述初乳与f68溶液的体积比为1:10～12；所述f68溶液的浓度为20～25mg/ml。
14、在一个优选的实施例中，所述葫芦多糖溶液与油相混合时的搅拌转速为300～800r/min，搅拌时间为25～35min。
15、在一个优选的实施例中，所述超声的时间为3～5min，超声的次数为1～3次，优选为超声2次，每次超声间隔2～5s。
16、本专利技术的第三方面提供一种疫苗佐剂在制备疫苗制剂中的应用，所述疫苗佐剂为第一方面提供的疫苗佐剂，所述疫苗制剂是由疫苗和疫苗佐剂混合配置而成；所述疫苗与疫苗佐剂的体积比为1:1～3；所述疫苗制剂为注射制剂或口服制剂。
17、在一个优选的实施例中，所述疫苗为禽流感疫苗或肠道靶向疫苗。
18、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果
19、(1)本专利技术中的聚乳酸-羟基乙酸能够有效地将葫芦多糖和维甲酸包封起来，并利用聚乳酸-羟基乙酸具有良好的靶向性以及缓释性，将葫芦多糖和维甲酸准确的递送到机体内的目标部位，提高了葫芦多糖的靶向性和缩短了作用时间，进而提高了葫芦多糖的作用效果；并且在葫芦多糖和维甲酸相互配合作用下，不仅使葫芦多糖能够有效提高机体的免疫力，同时维甲酸还能够作为肠黏膜的调节信号，通过促进foxp3调节性t细胞分化和免疫球蛋白iga产生，从而诱导粘膜免疫反应。
20、(2)本专利技术通过聚醚酰亚胺进行阳离子修饰，使疫苗佐剂表面带有正电荷，从而能够吸附大量的抗原在疫苗佐剂表面，吸附大量的抗原疫苗佐剂进入体内后被抗原呈递细胞捕获后进入溶酶体，在溶酶体中分解的疫苗佐剂诱导机体产生有效体液免疫反应，并在细胞质中产生有效细胞免疫反应，同时部分抗原和ra耦合后，能够呈递抗原诱导树突细胞产生肠粘膜归巢受体ccr9，而树突细胞将信号传导给t细胞及b细胞，使这些细胞均具有肠粘膜趋向性，从而有效的防治病毒引起的粘膜疾病。
21、(3)本专利技术含有葫芦多糖的疫苗佐剂能够解决葫芦多糖作为疫苗佐剂存在靶向性差、作用时间短的问题，便于药物的吸收，可以使药物缓慢地的释放，有效地延长药效，能显著提高动物免疫功能，对抵抗疫病有重要意义。同时，本专利技术作为一种中兽药，没有副作用。
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1.一种含有葫芦多糖的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂是以聚乳酸-羟基乙酸为载体，将葫芦多糖和维甲酸负载在聚乳酸-羟基乙酸上，再用聚醚酰亚胺溶液对负载有葫芦多糖和维甲酸的聚乳酸-羟基乙酸的表面进行阳离子修饰得到的；
2.一种权利要求1所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述葫芦多糖溶液与所述油相的体积比为1:3～5；
4.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷。
5.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述初乳与所述F68溶液的体积比为1:10～12；
6.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述葫芦多糖溶液与油相混合时的搅拌转速为300～800r/min，搅拌时间为25～35min。
7.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述超声的时间为3～5min，超声的次数为1～3次。
8.一种权利要求1所述的疫苗佐剂在制备疫苗制剂中的应用。>
9.根据权利要求8所述的疫苗佐剂在制备疫苗制剂中的应用，其特征在于，所述疫苗制剂是由疫苗和疫苗佐剂混合配置而成；
10.根据权利要求9所述的疫苗佐剂在制备疫苗制剂中的应用，其特征在于，所述疫苗为禽流感疫苗或肠道靶向疫苗。
...【技术特征摘要】
1.一种含有葫芦多糖的疫苗佐剂，其特征在于，所述疫苗佐剂是以聚乳酸-羟基乙酸为载体，将葫芦多糖和维甲酸负载在聚乳酸-羟基乙酸上，再用聚醚酰亚胺溶液对负载有葫芦多糖和维甲酸的聚乳酸-羟基乙酸的表面进行阳离子修饰得到的；
2.一种权利要求1所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述葫芦多糖溶液与所述油相的体积比为1:3～5；
4.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷。
5.根据权利要求2所述的疫苗佐剂的制备方法，其特征在于，所述初乳与所述f68溶液的体积比为1...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿得力江·吾斯曼，萨比热·热夏提，阿依扎达·木合塔尔，徐向阳，赛福丁·阿不拉，刘丹丹，买占海，瓦热斯·吐尔松，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：
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