【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，尤其是一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体及其筛选方法和应用。
技术介绍
1、胰腺癌
2、胰腺癌是全球发病率和致死率最高的肿瘤之一。随着诊疗水平的提高，很多肿瘤的死亡率已呈现降低的趋势，但胰腺癌的死亡率依然在缓慢增加，5年生存率仅有12％，中位生存期为6个月，预计到2030年将成为致死率第二的肿瘤1。双胰腺导管腺癌(pancreaticductal adenocarcinoma，pdac)是胰腺癌的主要类型，占胰腺癌的90％。胰腺癌的致病因素包括遗传因素(10％)，抽烟(20％)，肥胖，酗酒等2。现阶段对于胰腺癌的研究发现，kras，smad4，cdkn2a和tp53是驱动胰腺癌发生的4个主要基因3。
3、胰腺癌的转移
4、肝转移是胰腺癌致死的主要原因之一，研究表明80％的胰腺癌首诊病人存在肝转移，无法手术。仅1/4到1/3的转移型胰腺癌对于化疗、放疗等治疗方法有响应，且易产生耐药。20％的病人经手术后依然有80％的病人会出现肝转移。转移型胰腺癌的五年生存率仅有3％，如何提高转移型胰腺癌病人的生存率是一个十分关键的问题4。
5、胰腺癌的治疗
6、当前对于胰腺癌的治疗方式较少，主要包括手术治疗、化疗、放疗和靶向治疗。手术是唯一可治愈的机会，但手术只能针对未发生转移的胰腺癌病人，且切除后仍然有较大的概率会复发和转移。另外80％-85％的病人发现时已经处于晚期发生了转移，无法进行手术治疗，对此一般使用吉西他滨作为晚期胰腺癌患者的标准一线姑息治疗方案，
7、核酸适体
8、核酸适体(aptamer)是通过selex技术筛选得到的能够高度特异性、高亲和性结合靶标分子的单链寡核苷酸。其通过折叠成二级和三级结构，借助静电引力、疏水作用力、范得华力等分子间的作用力，与靶分子构象的匹配，从而特异地识别靶分子。核酸适体具有与抗体相似的分子识别功能，但与抗体相比具有更多的应用优势，例如可不依赖生物体在体外筛选，靶分子范围广(金属离子、毒素、病毒、细菌、细胞、组织等)，分子量小，低免疫原性、易固相合成与标记，化学稳定性好、可常温保存等。核酸适体在疾病标志物的发现、分子诊断、靶向治疗、分子病理等领域显示出巨大的临床应用前景7。因此需要设计一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体及其筛选方法和应用。
9、1.rahib，l.，wehner，m.r.，matrisian，l.m.&nead，k.t.estimated projectionof us cancer incidence and death to 2040.jama netw open 4，e214708(2021).
10、2.ryan，d.p.，hong，t.s.&bardeesy，n.pancreatic adenocarcinoma.n eng1 jmed 371，2140-2141(2014).
11、3.makohon-moore，a.p.et al.limited heterogeneity of known driver genemutations among the metastases of individual patients with pancreaticcancer.nat genet 49，358-366(2017).
12、4.siegel，r.l.，miller，k.d.，wagle，n.s.&jemal，a.cancer statistics，2023.ca cancer j clin 73，17-48(2023).
13、5.falcomata，c.et al.context-specific determinants of theimmunosuppressive tumor microenvironment in pancreatic cancer.cancer discov13，278-297(2023).
14、6.springfeld c，et al.neoadjuvant therapy for pancreatic cancer.naturereviews clinical oncology 20，318-37(2023).
15、7.he，j.et al.recent progress of aptamer-drug conjugates in cancertherapy.acta pharm sin b 13，1358-1370(2023).
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体及其筛选方法和应用。
2、本专利技术通过下述方案实现：
3、一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，所述核酸适体包含seq id no.1、seq idno.2、seq id no.3中任一项所示核苷酸序列的全部或者部分。
4、所述核酸适体包含序列为seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3中的任一项具有至少30％同源性且高转移风险胰腺癌靶向的核苷酸序列。
5、所述核酸适体包含由seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3中的任一项所示的核昔酸序列转录的rna序列。
6、修饰所述核酸适体的骨架或糖环，所述修饰包括硫代、甲氧基、乙基、galnac修饰。
7、所述核酸适体包含seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3中任一项所示核苷酸序列的截短、延长或碱基取代。
8、所述核酸适体包含的序列的延长是与其他核酸序列进行偶连；所述其他核酸序列包括sirna、aso、mirna。
9、所述核酸适体包含的序列的延长或碱基取代是与放射性物质、荧光物质、药物、抗体、细菌进行偶连；所述药物包括碱基类似物，通过碱基取代或末端连接的形式偶连。
10、一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体所包含的序列的筛选方法，该方法包括以下步骤：
11、1)将肿瘤组织匀浆形成细胞群；
12、2)将ssdna文库与步骤1)所得的高转移风险的组织匀浆液结合；
13、3)pcr扩增与步骤2)结合的序列；
14、4)将步骤3)所得的扩增产物与低转移风险组织匀浆液结合，保留并扩增不结合的序列；
15、5)将扩增产物与正常组织匀浆液结合，保留并扩增不结合的序列；经过多轮步骤1)-5)的筛选，最终扩增及序列鉴定即得高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体序列；
16、组织进行匀浆形成细胞团，所述细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3中任一项所示核苷酸序列的全部或者部分。
2.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3中的任一项具有至少30％同源性且高转移风险胰腺癌靶向的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含由SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3中的任一项所示的核昔酸序列转录的RNA序列。
4.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：修饰所述核酸适体的骨架或糖环，所述修饰包括硫代、甲氧基、乙基、GalNAc修饰。
5.根据权利要求1-4任一权利项所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3中任一
6.根据权利要求5所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含的序列的延长是与其他核酸序列进行偶连；所述其他核酸序列包括siRNA、ASO、miRNA。
7.根据权利要求5所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含的序列的延长或碱基取代是与放射性物质、荧光物质、药物、抗体、细菌进行偶连；所述药物包括碱基类似物，通过碱基取代或末端连接的形式偶连。
8.一种如权利要求1-7中任一权利项所述高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体所包含的序列的筛选方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
9.一种如权利要求1-7任一权利项所述的高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体的应用，其特征在于：所述核酸适体序列用于胰腺癌的诊断。
10.一种如权利要求1-7任一权利项所述的高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体的应用，其特征在于：所述核酸适体序列用于胰腺癌的治疗。
...【技术特征摘要】
1.一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含seq idno.1、seq id no.2、seq id no.3中任一项所示核苷酸序列的全部或者部分。
2.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含序列为seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3中的任一项具有至少30％同源性且高转移风险胰腺癌靶向的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含由seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3中的任一项所示的核昔酸序列转录的rna序列。
4.根据权利要求1所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：修饰所述核酸适体的骨架或糖环，所述修饰包括硫代、甲氧基、乙基、galnac修饰。
5.根据权利要求1-4任一权利项所述的一种高转移风险胰腺癌靶向的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体包含seq id no.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，孙洋，杨建宇，徐添，孙勇伟，刘颖斌，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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