一种单个细胞外囊泡表面聚糖的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种单个细胞外囊泡表面聚糖的检测方法，以聚糖特定基团的衍生化为出发点，成功实现了细胞外囊泡表面聚糖的衍生化和标记，结合高灵敏流式细胞仪，能够对单个细胞外囊泡表面聚糖特征的异质性进行解析。本发明专利技术直接在单个细胞外囊泡水平对其表面聚糖进行检测，有效规避了样本中共存杂质对检测结果的干扰；无需使用糖类似物前体进行繁琐耗时的培养和标记，可直接对单个细胞外囊泡表面的聚糖进行原位标记，因而其适用范围广，可应用于多种细胞系来源、体液来源以及不可培养细胞来源细胞外囊泡表面聚糖的分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种单个细胞外囊泡表面聚糖的检测方法。

技术介绍

1、聚糖(glycan)是由多种不同单糖单元组装而成的具有明确结构的大分子聚合物，可修饰于蛋白质、脂质乃至rna进而对这些生物分子的结构和功能进行调控。几乎所有的细胞膜最外表面都覆盖着一层由聚糖组成的厚重糖萼，参与细胞粘附、信号转导、细胞间互作和病原体入侵等生物过程。

2、细胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)是粒径在30～200nm、由磷脂双层膜包被的纳米小泡。亲本细胞通过内源分选将特定的货物装载入囊泡，使其成为细胞间物质交流和信息传递的信使。同细胞膜一样，细胞外囊泡的外膜也环绕着一层聚糖，参与包括受体识别、细胞摄取和癌症转移在内等生理和病理过程，对其进行准确分析对于evs生物学功能的了解和后续应用的开发尤其重要。

3、目前，基于凝集素的免疫印迹技术或者elisa技术被广泛用于evs聚糖的检测，通过凝集素这一类可识别特定聚糖结构的糖结合蛋白的识别可以确定evs中存在的特定聚糖。这些方法虽然通量高、操作便捷，但也存在特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种单个细胞外囊泡表面聚糖的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述衍生化试剂选自NaIO4、半乳糖氧化酶和糖基转移酶。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述结合基团包括羟胺基团、叠氮基团、亲和素基团、炔烃基团、反式环辛烯基团、四嗪基团、抗体基团和受体基团中至少一种。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述炔烃基团包括双环[6.1.0]双炔基团、和二苯并环辛炔基团。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述指示基团包括荧光染料基团和功能蛋白基团。

6...

【技术特征摘要】

1.一种单个细胞外囊泡表面聚糖的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述衍生化试剂选自naio4、半乳糖氧化酶和糖基转移酶。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述结合基团包括羟胺基团、叠氮基团、亲和素基团、炔烃基团、反式环辛烯基团、四嗪基团、抗体基团和受体基团中至少一种。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述炔烃基团包括双环[6.1.0]双炔基团、和二苯并环辛炔基团。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述指示基团包括荧光染料基团和功能蛋白基团。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜晓梅，蔡年桂，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：